丙泊酚促進(jìn)恐懼記憶消退中海馬齒狀回GABAAa5受體的作用研究.pdf

1、背景：嚴(yán)重的創(chuàng)傷產(chǎn)生的恐懼記憶與背景環(huán)境中的中性線索相關(guān)聯(lián)，并被不斷的鞏固和重新體驗(yàn)，嚴(yán)重影響人類(lèi)健康，導(dǎo)致嚴(yán)重的抑郁癥，其慢性化發(fā)展可導(dǎo)致嚴(yán)重的精神疾病----創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（Post-traumatic Stress Disorder，PTSD）。麻醉醫(yī)生在臨床工作中偶爾遇到的術(shù)中意外知曉和 ICU的創(chuàng)傷性治療會(huì)給患者們?cè)斐闪藝?yán)重的心理障礙，患者反復(fù)體驗(yàn)這種心理創(chuàng)傷將會(huì)發(fā)展為創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙，給患者和社會(huì)帶來(lái)的潛在危害引起了社會(huì)及醫(yī)學(xué)

2、學(xué)者們的嚴(yán)重關(guān)注。有研究顯示，創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙患者的海馬區(qū)神經(jīng)功能受損，同時(shí)伴隨神經(jīng)元突觸可塑性的下調(diào)是其病理生理的主要機(jī)制。γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）是抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)生中的細(xì)胞增殖、分化、遷移及突觸整合，GABA能神經(jīng)遞質(zhì)是神經(jīng)發(fā)生中神經(jīng)元活動(dòng)速度的主要調(diào)節(jié)因素。有研究顯示，增加 GABA能遞質(zhì)的釋放，通過(guò)激活 GABAA受體途徑，可以刺激海馬齒狀回（Dentate Gyrus，DG）神

3、經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化為神經(jīng)元。丙泊酚是臨床常用的鎮(zhèn)靜藥物，是A型γ-氨基丁酸能受體激動(dòng)劑，具有起效快，蘇醒快，可控性強(qiáng)，和不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)。目前還沒(méi)有臨床報(bào)道能夠明確丙泊酚是否對(duì)創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的高危人群起到早期的預(yù)防作用，降低創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)生率。作為A型γ-氨基丁酸能受體激動(dòng)劑，我們目前的基礎(chǔ)研究顯示丙泊酚降低小鼠的恐懼記憶，但是其機(jī)制還不清楚，丙泊酚是否通過(guò)GABA受體促進(jìn)海馬DG區(qū)神經(jīng)再生還需要明確。
　　目的：通過(guò)建立創(chuàng)傷

4、后應(yīng)激障礙小鼠模型，給予小鼠丙泊酚處理，觀察小鼠對(duì)恐懼記憶和學(xué)習(xí)記憶能力，為臨床麻醉藥物選擇提供理論支持。并進(jìn)一步研究海馬神經(jīng)再生及其分子機(jī)制以探討丙泊酚對(duì)創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的保護(hù)作用的分子機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)采用8-9周齡的C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為四組，刺激+丙泊酚組（Shock+ Propofol，Sh+prop）,刺激+生理鹽水組（Shock+Normal Saline，Sh+NS），空白對(duì)照組（Sham）和丙泊酚組（Pr

5、opofol，Prop）。刺激是通過(guò)情景條件恐懼反射實(shí)驗(yàn)將非條件性刺激（電擊）和條件性刺激（環(huán)境和聲音）進(jìn)行記憶偶聯(lián)。電擊強(qiáng)度為0.7mA，持續(xù)時(shí)間為0.5s，環(huán)境溫度為22℃，濕度為50-60％，光照強(qiáng)度為80勒克斯，聲音強(qiáng)度為90dB，頻率為1000Hz。丙泊酚和生理鹽水處理組在刺激結(jié)束后30分鐘腹腔注射丙泊酚（150mg/kg）和同體積的生理鹽水，在小鼠恢復(fù)翻正反射后再次腹腔注射75mg/kg丙泊酚?？瞻讓?duì)照組和丙泊酚組同樣進(jìn)行刺

6、激流程而沒(méi)有足底電擊。刺激后1周，4周和6周分別進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)(elevated plus maze，EPM)，曠場(chǎng)試驗(yàn)(open field，OF)，水迷宮實(shí)驗(yàn)（Morris water maze，MWM)，情景測(cè)試和聲音測(cè)試。觀察小鼠焦慮行為，對(duì)環(huán)境和聲音刺激的恐懼行為和小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，并對(duì)各組小鼠的行為進(jìn)行比較以觀察丙泊酚對(duì)創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的作用。在刺激后1周，4周和6周進(jìn)行取材，留取小鼠海馬組織，進(jìn)行蛋白印跡實(shí)驗(yàn)，比較各

7、組小鼠 GABAA受體α5亞單位的蛋白表達(dá)情況；留取小鼠腦組織，進(jìn)行高爾基染色，激光共聚焦顯微鏡下觀察海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞樹(shù)突棘的密度，以比較各組小鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)再生情況；對(duì)小鼠進(jìn)行戊二醛灌注，留取小鼠海馬DG區(qū)，電子顯微鏡下觀察小鼠海馬DG區(qū)突觸的數(shù)量和突觸長(zhǎng)度，以比較各組小鼠的突觸形態(tài)的改變。
　　結(jié)果：刺激后，小鼠對(duì)條件性刺激特別是聲音刺激表現(xiàn)出顯著的恐懼反應(yīng)，這種強(qiáng)烈的恐懼反應(yīng)一直持續(xù)到刺激后第6周。訓(xùn)練后4周，發(fā)生PTS

8、D的小鼠出現(xiàn)明顯的焦慮樣行為，在曠場(chǎng)試驗(yàn)中表現(xiàn)為中央?yún)^(qū)停留時(shí)間和中央?yún)^(qū)穿越次數(shù)減少。刺激后PTSD小鼠表現(xiàn)出典型的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的癥狀，表現(xiàn)為在刺激后的環(huán)境測(cè)試和聲音測(cè)試中，刺激+生理鹽水組的僵直時(shí)間比空白對(duì)照組僵直時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P<0.05），而丙泊酚能夠起到保護(hù)作用，表現(xiàn)為刺激+丙泊酚組的僵直時(shí)間較刺激+生理鹽水組顯著降低（P<0.05），而且丙泊酚的保護(hù)作用持續(xù)至刺激后6周。發(fā)生PTSD的小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力受損，表現(xiàn)為在水迷宮實(shí)驗(yàn)

9、中，目標(biāo)象限停留時(shí)間和穿越次數(shù)減少。PTSD小鼠海馬GABAA受體α5亞單位的表達(dá)量下降。高爾基染色和電子顯微鏡顯示，發(fā)生創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的小鼠，在刺激后1周，4周和6周其海馬DG區(qū)樹(shù)突棘密度降低，突觸減少，和突觸長(zhǎng)度變短。而丙泊酚能夠逆轉(zhuǎn)這些改變，表現(xiàn)出對(duì)創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的保護(hù)作用。
　　結(jié)論：情景條件恐懼反射實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚪?chuàng)傷后應(yīng)激障礙小鼠模型。刺激結(jié)束早期給予小鼠麻醉劑量丙泊酚能夠顯著改善PTSD小鼠的恐懼反應(yīng)，對(duì)降低創(chuàng)傷后應(yīng)激障