榛花消腎安膠囊干預(yù)實驗性糖尿病大鼠足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化notch通路研究.pdf

1、目的:研究發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病是以尿蛋白漏出，腎功能進(jìn)行性惡化為主要特征，而研究蛋白尿大多是關(guān)于細(xì)胞外基質(zhì)、腎小球基底膜等領(lǐng)域，但是系膜基質(zhì)堆積并不能夠徹底解釋清楚產(chǎn)生蛋白尿的原因，近年發(fā)現(xiàn)腎小球濾過膜的屏障足細(xì)胞在糖尿病腎病的演變有著關(guān)鍵的作用，而足細(xì)胞受諸多因素的影響，而在這些起始因素的下游，又有多條信號傳導(dǎo)通路在其中發(fā)揮著重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)Notch信號通路與足細(xì)胞密切相關(guān)且在DN的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。為糖尿病腎病的預(yù)防和治

2、療開辟了新的途徑。
　　根據(jù)“毒損腎絡(luò)，邪伏膜原”理論，南征教授針對糖尿病腎病而制定的臨床常用有效方劑“榛花消腎安膠囊”，在臨床治療過程中療效顯著。本實驗通過檢測糖尿病大鼠足細(xì)胞相關(guān)分子Synaptopodin、TRPC6的蛋白表達(dá)情況及Notch信號通路相關(guān)蛋白Notch1、Jagged1、NICD、Hes1的表達(dá)的影響，探討“榛花消腎安膠囊”治療糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞損傷與Notch信號通路相關(guān)性的機理。
　　方法:1.1

3、00只wistar雄性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，隨機分為正常對照組（10只）和造模組（90只），對造模組進(jìn)行腹腔注射1％STZ（35mg/Kg），72小時后進(jìn)行尾靜脈采血，當(dāng)檢測空腹血糖＞16.7mmol/L者認(rèn)為造模成功。將造模成功的77只實驗性大鼠模型隨機分為模型對照組20只，中藥（榛花消腎安膠囊）高、低劑量組，西藥（厄貝沙坦片）組各19只。中藥高劑量組給予1g/kg/d，中藥低劑量組給予0.25g/kg/d，榛花消腎安膠囊混懸液灌胃;西

4、藥對照組予厄貝沙坦混懸液20mg/kg/d灌胃，連續(xù)灌胃觀察12周。觀察大鼠一般狀態(tài)，記錄24小時體重、尿量;實驗結(jié)束時記錄腎重/體重，檢測空腹血糖、24h尿微量白蛋白;檢測TC、TG，Scr、BUN。
　　2.光學(xué)顯微鏡和透射電鏡對腎組織病理形態(tài)學(xué)變化及足細(xì)胞變化進(jìn)行觀察，分析榛花消腎安膠囊對糖尿病大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)的影響，研究足細(xì)胞Synaptopodin、TRPC6的蛋白表達(dá)。
　　3.應(yīng)用Rt-PCR檢測榛花消腎安膠囊

5、對糖尿病大鼠Notch信號通路相關(guān)蛋白Jagged1、Notch1、Synaptopodin、TRPC6、Hes1m RNA表達(dá)。
　　4.利用Western blot觀察榛花消腎安膠囊對糖尿病大鼠Notch信號通路相關(guān)蛋白Jagged1、NICD、Hes1的影響及與足細(xì)胞損傷的相關(guān)性。
　　結(jié)果:1.榛花消腎安膠囊具有調(diào)理糖尿病大鼠的“三多一少”臨床癥狀。
　　2.榛花消腎安膠囊能夠降低糖尿病大鼠膽固醇、空腹血糖值、

6、低密度脂蛋白、甘油三酯，提高高密度脂蛋白的含量。
　　3.榛花消腎安膠囊能夠抑制糖尿病大鼠腎臟體積肥大，使早期糖尿病大鼠尿中蛋白的排出減少，BUN和Scr的含量降低，提高腎功能。
　　4.榛花消腎安膠囊能夠修復(fù)糖尿病大鼠腎臟組織生理形態(tài)，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞未見異常，足突組織部分融合，GBM尚未明顯增厚，系膜區(qū)未見顯著增加。
　　5.榛花消腎安膠囊能夠下調(diào)糖尿病大鼠的腎臟中的TRPC6蛋白的表達(dá)，上調(diào)Synaptopodi

7、n的表達(dá)，具有保護(hù)腎小球足細(xì)胞作用。
　　6Rt-PCR的結(jié)果顯示榛花消腎安膠囊對實驗性糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞中與對照組比較，給藥糖尿病組小鼠的Jagged1、Notch1、TRPC6、Hes1mRNA的表達(dá)量明顯下調(diào)(P＜0.01)，Synaptopodin表現(xiàn)為上調(diào)。
　　7.Western blot的結(jié)果顯示榛花消腎安膠囊對實驗性糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞中與正常對照組比較，給藥糖尿病組小鼠的Jagged1、NICD1、Hes

8、1蛋白表達(dá)量明顯下調(diào)(P＜0.01)。
　　8.榛花消腎安膠囊對腎臟的保護(hù)作用呈現(xiàn)藥物濃度依賴性，高劑量組優(yōu)于低劑量組。
　　結(jié)論:榛花消腎安膠囊能夠調(diào)理糖尿病大鼠生理狀態(tài)和治療三多一少的癥狀;抑制早期腎臟腫大;降低空腹血糖、血脂，使腎臟功能得到保護(hù)，其作用機制考慮是榛花消腎安膠囊通過干預(yù)Synaptopodin、TRPC6，下調(diào)Notch1、Jagged1、Hes1的表達(dá)，從而抑制Notch信號通路以降低足細(xì)胞的損害而實現(xiàn)