基于納米金顆粒和無(wú)標(biāo)記核酸探針的SNP檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、背景及目的:單核苷酸多態(tài)性SNP主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性,是可遺傳變異中最常見(jiàn)的突變。SNP遺傳穩(wěn)定性強(qiáng),數(shù)量多,覆蓋面廣,已經(jīng)取代限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)和微衛(wèi)星多態(tài),成為第三代DNA分子標(biāo)記。人類(lèi)的SNP通常表現(xiàn)為雙等位基因多態(tài)性,可分為突變純合子、正常純合子和雜合子三種基因型,許多疾病的發(fā)生發(fā)展與單個(gè)堿基的突變密切相關(guān),準(zhǔn)確快速地檢測(cè)SNP基因型,對(duì)疾病、臨床檢測(cè)和分子診斷等有重大意義。本研究以β

2、地中海貧血的球蛋白基因的IVS-2-654和CD17這二個(gè)點(diǎn)突變作為研究對(duì)象,通過(guò)納米金顆粒技術(shù)提高不對(duì)稱(chēng)PCR擴(kuò)增特異性得到檢測(cè)靶序列,運(yùn)用無(wú)標(biāo)記核酸探針技術(shù),聯(lián)合連接酶的高保真連接特性,構(gòu)建一種不同基因型之間有顯著熔點(diǎn)差異的單核苷酸多態(tài)性SNP的檢測(cè)方法。
　　方法:利用納米金顆粒介導(dǎo)不對(duì)稱(chēng)PCR得到檢測(cè)靶序列,構(gòu)建一種新的無(wú)標(biāo)記核酸探針,綜合連接酶技術(shù)和熔點(diǎn)差異擴(kuò)大技術(shù),通過(guò)連接反應(yīng)介導(dǎo)顯著提高不同基因型之間的熔點(diǎn)差異,然后

3、根據(jù)不同的熔點(diǎn)峰快速準(zhǔn)確地進(jìn)行 SNP多態(tài)性檢測(cè)和分型。
　　結(jié)果:適宜濃度的納米金顆粒提高了PCR擴(kuò)增效率,通過(guò)無(wú)標(biāo)記核酸探針,在連接反應(yīng)過(guò)程中,各基因型產(chǎn)生了較大的熔點(diǎn)差異,實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確快速地點(diǎn)突變基因型分型,并成功對(duì)球蛋白基因的IVS-2-654和CD17這二個(gè)點(diǎn)突變的三種基因型進(jìn)行有效分型。
　　結(jié)論:通過(guò)納米金顆粒介導(dǎo)的不對(duì)稱(chēng)PCR擴(kuò)增,使PCR產(chǎn)量和效率得以提高,獲得了高質(zhì)量的產(chǎn)物。設(shè)計(jì)了一種新的無(wú)標(biāo)記核酸探針,通