不同牙周狀態(tài)下牙齦組織內質網應激水平的差異性探究.pdf

1、大量研究表明細胞凋亡參與了牙周疾病的病理生理過程，而與細胞凋亡相關的通路主要分為線粒體途徑、死亡受體途徑、顆粒酶 B途徑以及近年來新發(fā)現(xiàn)的內質網應激（endoplasmic reticulum stress，ERS）途徑。ERS是組織及細胞在不利的生存環(huán)境下產生的一種應激性反應，其目的在于維持細胞穩(wěn)態(tài)，主要途徑為保護性的非折疊蛋白反應( unfolded protein response，UPR)。UPR可以通過蛋白質生成減慢、折疊功能

2、加強、未折疊蛋白降解等途徑適應內質網應激，對細胞起保護作用，但是當刺激持續(xù)存在或強度過大，超過細胞自我調節(jié)能力時則會誘導細胞發(fā)生凋亡，細胞整體由促生存向促凋亡方向發(fā)生轉變。
　　牙齦作為唯一暴露于口腔及各類牙周疾病起始部位的牙周組織，探究牙齦組織從健康到慢性牙齦炎再到慢性牙周炎及侵襲性牙周炎的發(fā)展過程中其內質網應激水平發(fā)生的改變具有重要的臨床意義。當牙周疾病發(fā)生時，牙周致病菌的致病成分及其產生的毒素等可以使牙齦上皮的多種粘結蛋白如

3、上皮鈣黏素和封閉蛋白-1等的表達水平出現(xiàn)異常，上皮細胞間的相互連接受到破壞發(fā)生，牙齦結合上皮通透性顯著增加，導致菌斑微生物更易于穿過牙齦上皮的物理屏障，到達上皮深層組織，從而促進牙周炎的發(fā)展；此外，牙齦上皮分泌的多種免疫因子如抗菌肽LL-37、人β防御素等在抵御菌斑微生物的入侵，預防牙周病的發(fā)展過程中均起到了重要作用。
　　目前已有文獻報道ERS參與了慢性牙周炎的發(fā)病過程，有研究報道指出在慢性牙周炎情況下內質網應激上游標志物GRP

4、78及下游凋亡相關因子C HOP升高，但是健康與慢性牙齦炎，侵襲性牙周炎情況下ERS水平的差異表達情況尚無相關報道。
　　目的：
　　初步探討健康、慢性牙齦炎、慢性牙周炎及侵襲性牙周炎牙齦組織中內質網應激水平是否存在差異。
　　方法：
　　探究不同狀態(tài)下牙齦組織中內質網應激標志物 GRP78、PERK、ATF4、CHOP的表達變化：
　　臨床收集健康、慢性牙齦炎、慢性牙周炎及侵襲性牙周炎患者的牙齦，通過免疫

5、組化染色對牙齦組織中內質網應激標志物的表達水平進行定性分析；實時定量PCR檢測牙齦組織中GRP78、PERK、ATF4、CHOP的mRN A表達量；蛋白質印跡法檢測牙齦組織中GRP78、PERK、ATF4、CHOP的蛋白表達量。
　　結果：
　　1.免疫組化結果顯示：
　　GRP78及 CHO P陽性表達細胞率均為侵襲性牙周炎組＞慢性牙周炎組＞慢性牙齦炎組＞牙周健康組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；PERK及 A

6、TF4牙齦組織中陽性細胞表達率的統(tǒng)計結果為慢性牙周炎＞慢性牙齦炎＞健康及侵襲性牙周炎組，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），健康組及侵襲性牙周炎組中PERK及ATF4兩種因子表達量的差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.Real-timePCR結果顯示：
　　GRP78、CHO P mRNA表達量呈現(xiàn)一致性，均表現(xiàn)為健康組＜慢性牙齦炎組＜慢性牙周炎組＜侵襲性牙周炎組，且差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。PERK m

7、RNA表達量為健康組與侵襲性牙周炎組間無顯著性差異（P＞0.05），慢性牙齦炎組及慢性牙周炎組表達均有升高，且慢性牙周炎組高于慢性牙齦炎組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。ATF-4mRNA的表達結果為健康組及侵襲性牙周炎組間表達量未見顯著性差異（P＞0.05）；慢性牙齦炎組與慢性牙周炎組高于健康及侵襲性牙周炎組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；但慢性牙齦炎組及慢性牙周炎組間表達未見顯著性差異（P＞0.05）。
　　3.蛋白

8、印跡法結果顯示：
　　GRP78、CHOP蛋白在健康組、慢性牙齦炎組、慢性牙周炎組及侵襲性牙周炎組的表達量為：健康組＜慢性牙齦炎組＜慢性牙周炎組＜侵襲性牙周炎組，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；PERK、ATF-4蛋白的表達情況為：健康組與侵襲性牙周炎組＜慢性牙齦炎組＜慢性牙周炎組，組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而健康組及侵襲性牙周炎兩組間PERK、ATF-4蛋白的表達量的差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。