周期性張應變條件下血管內皮細胞源性微體在內皮細胞增殖中的作用.pdf

1、內皮源性微體（endothelial microparticles，EMPs）是由活化或凋亡的內皮細胞（endothelial cells，ECs）產(chǎn)生，直徑介于0.1μm到1μm之間的小顆粒。近年來，EMPs在細胞間生物信息傳遞以及心血管疾病發(fā)病過程中的作用逐漸引起重視。已有研究表明，在動脈粥樣硬化和高血壓等心血管疾病發(fā)病過程中，ECs表面蛋白如細胞間黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecul

2、e-1，ICAM-1）、血管細胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）等表達上調，使得 ECs能夠招募血液中的細胞尤其是白細胞，從而參與血管重建。然而，高血壓狀態(tài)下在異常增高的動脈周期性張應變（cyclic strain）的作用下，以及血管炎癥狀態(tài)下在腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）刺激下，ECs所產(chǎn)生的EMPs是否也同樣高表達ECs表面

3、蛋白，是否能作為信息載體調控ECs增殖尚不清楚。
　　本實驗對體外模擬高血壓狀態(tài)（高周期性張應變）和TNF-α刺激這兩種條件下ECs產(chǎn)生的EMPs進行研究，探討了高張應變條件下產(chǎn)生的EMPs對ECs增殖的影響。采用Flexercell細胞張應變加載系統(tǒng)對大鼠胸主動脈ECs分別施加5％（正常生理狀態(tài)）和18%（模擬高血壓狀態(tài)）幅度的周期性張應變，加載頻率均為1.25 Hz，加載持續(xù)時間為24 h，然后收集上清液，進行超速離心，棄上清

4、，提取得到EMPs；用親脂性苯乙烯基（lipophilic styryl）以及電鏡對離心得到的EMPs進行形態(tài)鑒定；用流式細胞術對不同加載幅度的張應變加載以及 TNF-α刺激產(chǎn)生的EMPs進行 AnnexinV陽性計數(shù)與EMPs表面ICAM-1表達量測定；熒光定量PCR（RT-PCR）檢測不同張應變條件下ECs的TNF-αmRNA表達變化；對收集到的不同張應變條件下產(chǎn)生的EMPs與正常ECs進行共培養(yǎng)，BrdU-ELISA法檢測不同張應

5、變作用下產(chǎn)生的EMPs對ECs增殖的影響。
　　實驗結果顯示，18%高張應變組ECs所產(chǎn)生AnnexinV陽性EMPs的數(shù)量明顯高于5%正常張應變組（p<0.05）；與5%正常張應變組相比，18%高張應變組EMPs表面ICAM-1分子的表達量顯著上升（p<0.05）；同樣，與對照組相比，TNF-α刺激條件下 ECs所產(chǎn)生AnnexinV陽性EMPs的數(shù)量與EMPs表面ICAM-1的表達也顯著上升（p<0.05）；與5%正常張應變組

6、相比，18%的高張應變條件下ECs的TNF-αmRNA表達量顯著上升（p<0.05）；與5%正常張應變組相比，18%高張應條件下產(chǎn)生的EMPs刺激ECs后OD450吸光度顯著上升（p<0.05）。結果表明，高張應變和TNF-α刺激條件下ECs所產(chǎn)生的EMPs數(shù)量增加，且都攜帶了細胞表面分子ICAM-1；高張應變條件下ECs產(chǎn)生的EMPs具有較強的促進ECs增殖的作用。
　　本研究發(fā)現(xiàn)了高周期性張應變與 TNF-α刺激條件下 ECs