霉茶蛋白對(duì)SHR大鼠血管重構(gòu)的影響及其機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：提取霉茶蛋白，并進(jìn)行含量測定。以原發(fā)性高血壓大鼠（SHR）作為模型，用霉茶蛋白進(jìn)行干預(yù)，研究霉茶蛋白對(duì)SHR大鼠血壓的作用，并借助分子生物學(xué)技術(shù)研究霉茶蛋白對(duì)其胸主動(dòng)脈重構(gòu)的影響，并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.霉茶蛋白的提取和含量測定
　　首先分別以去離子水和0.1mol/L的NaOH溶液為霉茶蛋白的提取溶劑，按照一定的提取方法提取蛋白質(zhì)，并通過凱氏定氮法，進(jìn)行蛋白質(zhì)的含量
　　測定。

2、　　2.霉茶水提蛋白和霉茶堿提蛋白對(duì)ACE的抑制率
　　根據(jù)蛋白質(zhì)含量測定的結(jié)果，用等量的霉茶水提蛋白和霉茶堿提蛋白分別干預(yù)ACE，經(jīng)高效液相（HPLC）法檢測兩種蛋白質(zhì)對(duì)ACE活性的抑制率，通過對(duì)ACE抑制率的比較，篩選出霉茶蛋白的提取溶劑。
　　3.霉茶蛋白對(duì)SHR大鼠血管重構(gòu)的影響及其機(jī)制初步研究
　　將40只SHR大鼠（雄性，7周齡）適應(yīng)性飼養(yǎng)5天后，按體重隨機(jī)分為4組（模型組、霉茶蛋白低劑量組、霉茶蛋白高劑量

3、組和復(fù)方羅布麻片組），每組10只，采用智能無創(chuàng)血壓計(jì)對(duì)其進(jìn)行血壓測量訓(xùn)練3周后給藥，給藥前各組間基礎(chǔ)血壓無明顯差異性（P>0.05）。霉茶蛋白低、高劑量組分別給予70mg·kg-1、140mg·kg-1霉茶蛋白溶液，陽性對(duì)照品組（復(fù)方羅布麻片）給藥劑量為50mg·kg-1，灌胃容量為10mL·kg-1，模型組灌胃給予等容量蒸餾水。每天灌胃給藥2次，連續(xù)灌胃7周。每周一次尾動(dòng)脈無創(chuàng)測壓法觀察大鼠血壓變化并記錄。末次給藥后以3％戊巴比妥鈉腹

4、腔注射45
　　mg·kg-1麻醉，斷頭取血，3000r·min-1離心15min，留取血清，分別用一氧化氮試劑盒和ELISA kit試劑盒檢測血清中NO和ET-1的含量。取胸主動(dòng)脈分為兩段，一段用4%多聚甲醛溶液固定，進(jìn)行HE染色切片用于觀察胸主動(dòng)脈形態(tài)；另一段于-80℃凍存用于Real-Time PCR檢測，并測定胸主動(dòng)脈組織中eNOS、ACE、AngⅡ、c-myc、Bcl-2、p27基因的表達(dá)。結(jié)果：
　　1.成功提取

5、霉茶水提蛋白和霉茶堿提蛋白，并通過凱氏定氮法進(jìn)行蛋白質(zhì)含量測定，結(jié)果表明，測得霉茶水提蛋白中蛋白質(zhì)含量為42.43%，霉茶堿提蛋白中蛋白質(zhì)含量為62.27%。
　　2.高效液相法檢測ACE活性結(jié)果表明：霉茶水提蛋白和霉茶堿提蛋白均能抑制ACE的活性，且在一定范圍內(nèi)，隨著蛋白濃度的增加，對(duì)ACE的抑制作用也增強(qiáng)。同時(shí)表明，等蛋白量的霉茶水提蛋白對(duì)ACE的抑制率高于霉茶堿提蛋白。
　　3.SHR大鼠經(jīng)霉茶蛋白持續(xù)干預(yù)后，與模型組

6、相比，霉茶蛋白低、高劑量組從第二周開始可顯著降低SHR的血壓值；能降低血管中膜厚度且高劑量霉茶蛋白能明顯降低血管中膜厚度與管腔直徑比；能夠升高血清中NO的含量，降低ET-1的含量；抑制基因c-myc、Bcl-2、ACE的表達(dá)，促進(jìn)eNOS的表達(dá)，但對(duì)p27無影響。
　　結(jié)論：
　　1.凱氏定氮法能準(zhǔn)確的測定植物蛋白含量。
　　2.霉茶水提蛋白對(duì)ACE活性抑制率更高，故選擇去離子水作為霉茶蛋白的提取溶劑。
　　3.