TG2抑制劑對大鼠肺動脈高壓肺血管重構(gòu)的影響及其機制研究.pdf

1、目的:采用左肺切除加野百合堿(monocrotaline，MCT)注射建立大鼠肺動脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）模型，探討谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶2型(Transglutaminase2，TG2)在PAH形成中與肺血管重構(gòu)的關(guān)系，進一步探討TG2抑制劑胱胺二鹽酸（cystamine dihydrochloride）預(yù)防大鼠PAH肺血管重構(gòu)的作用及其機制，為臨床治療PAH尋找新的思路及干預(yù)靶點。

2、r>　　方法:1.將健康雄性SD大鼠30只隨機分為3組，即空白對照組(10只):不給予任何處理;模型組（10只）:左肺切除術(shù)后第7d于項背部注射MCT(60mg/kg)建立PAH模型;干預(yù)組（10只）:左肺切除加MCT注射同模型組，于術(shù)后第5d腹腔注射胱胺二鹽酸（112mg/kg），每天1次，持續(xù)給藥至術(shù)后35d。2.建模完成后檢測各組大鼠的平均肺動脈壓力（mean pulmonary artery pressure，mPAP）及右心肥

3、厚指數(shù)，將大鼠肺組織做肺彈力纖維染色、HE染色，觀察肺組織的病理改變，計算肺小動脈中膜厚度百分比(WT％)、肺小動脈管壁面積與血管總面積比值(WA％)、肺小動脈新生內(nèi)膜增殖度等指標(biāo)。3.采用熒光定量PCR檢測3組大鼠肺組織TG2、5-HTT及ROCK2 mRNA表達水平的變化。4.采用蛋白質(zhì)免疫印記(Western blot)檢測各組大鼠肺組織TG2、5-HTT、RhoA、ROCK2蛋白表達量變化。
　　結(jié)果:1.與對照組比較，于

4、35d模型組大鼠成功的誘導(dǎo)了PAH模型:mPAP明顯升高，出現(xiàn)了嚴(yán)重的右心室肥大，肺小動脈中膜明顯增厚，并有新生內(nèi)膜出現(xiàn)。與對照組比較，模型組mPAP、右心肥厚指數(shù)百分比(RV/(LV+S)％、肺小動脈中膜厚度百分比(WT％)、肺小動脈管壁面積與血管總面積比值(WA％)、新生內(nèi)膜增殖度百分比分別為[(55.60±5.75) mmHg、58.10±4.27％、46.03±7.14％、72.28±3.59％、78.77±6.50％，均明顯高

5、于對照組(22.02±1.98) mmHg、27.81±1.81％、21.66±4.23％、31.95±4.04％、0]。差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）。2.預(yù)防性使用胱胺二鹽酸后，干預(yù)組mPAP、右心肥厚指數(shù)、肺小動脈中膜厚度百分比(WT％)、肺小動脈管壁面積與血管總面積比值(WA％)，新生內(nèi)膜增殖度百分比分別為[(36.19±2.67) mmHg、38.87±2.64％、25.61±6.62％、40.77±8.70％，22.18

6、±4.52]。與模型組比較，均有明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）。3.RT-PCR結(jié)果顯示模型組大鼠TG2、5-HTT及ROCK2 mRNA表達水平(3.06±0.53、2.35±0.40、7.80±1.82)明顯高于對照組(0.30±0.35、0.49±0.29、0.83±0.91)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）;給予胱胺二鹽酸干預(yù)后，干預(yù)組TG2、5-HTT和ROCK2mRNA表達水平均有降低(1.28±1.35、

7、1.15±0.93、1.61±1.17)，與模型組大鼠比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）。4.Wsetem blot檢測肺組織TG2、5-HTT、RhoA、ROCK2表達量，結(jié)果顯示與對照組(1.35±0.12、1.54±0.12、0.57±0.05、0.92±0.11)相比較，模型組肺組織TG2、5-HTT、RhoA、ROCK2表達量顯著增加(2.18±0.16、2.17±0.09、1.12±0.07、1.64±0.08)，差異

8、有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）。而干預(yù)組TG2、5-HTT、RhoA、ROCK2表達較模型組則有不同程度的降低(1.68±0.41、1.64±0.11、0.68±0.06、1.02±0.19)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）。
　　結(jié)論:1.左肺切除+野百合堿成功誘導(dǎo)大鼠肺動脈高壓的形成，并出現(xiàn)了梗阻性肺動脈高壓典型肺血管重構(gòu)的病理特征。2.TG2抑制劑胱胺二鹽酸能一定程度預(yù)防PAH的形成。3.胱胺二鹽酸減輕大鼠PAH的形成可