卵泡液中多能蛋白聚糖的檢測及臨床意義.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述:
　　第一部分:多能蛋白聚糖在人卵泡中的表達
　　目的：多能蛋白聚糖（versican）在維持卵泡結構完整、卵泡發(fā)育、卵冠丘復合物擴張及排卵中起重要作用。本研究目的是明確versican在人卵泡細胞中表達的亞型類別，以及各種亞型的表達水平。
　　方法：收集臨床試管嬰兒患者的大卵泡（≥18mm）、小卵泡（≤10mm）的卵泡液，分離卵泡壁層顆粒細胞（以下簡稱為顆粒細胞），一部分細胞用于提取總

2、RNA，行實時熒光定量PCR（qRT-PCR）；一部分細胞用于提取蛋白，行western blot實驗。同時收集ICSI患者來源的卵丘顆粒細胞（以下均稱為卵丘細胞），分別行qRT-PCR和western blot實驗。
　　結果：qRT-PCR結果顯示，大卵泡和小卵泡顆粒細胞和卵丘細胞均表達versican的V0、V1、V2和V3四種亞型mRNA。在卵丘細胞和大卵泡顆粒細胞中V1表達均高于V0、V2和V3（P<0.05）；卵丘細胞

3、中V0和V2的表達量僅次于V1，而V3含量最低；大卵泡顆粒細胞的V2表達水平高于V0和V3（P<0.05），V0和V3表達量無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；在小卵泡顆粒細胞中，V2 mRNA表達量分別高于V0和V3（P<0.05），V1表達量高于V3（P<0.05），V2與V1、V1與V0、V0與V3表達量的差異均無統(tǒng)計學意義。
　　V0和V1 mRNA在卵丘細胞中的表達量分別高于在大卵泡和小卵泡顆粒細胞中的量（P<0.05），而在

4、大、小卵泡顆粒細胞中的表達量均無統(tǒng)計學差異；V2在卵丘細胞中表達量高于大卵泡顆粒細胞（P<0.05），但V2在大卵泡顆粒細胞與小卵泡顆粒細胞、卵丘細胞與小卵泡顆粒細胞中表達量均無統(tǒng)計學差異；V3在大卵泡顆粒細胞中表達量高于卵丘細胞和小卵泡顆粒細胞（P<0.05），在卵丘細胞和小卵泡顆粒細胞中表達量無統(tǒng)計學差異。
　　Western blot結果顯示，卵泡顆粒細胞主要表達V1、V2和V3蛋白亞型，V0亞型的條帶均很弱，而卵丘細胞表達

5、V0、V1、V2和V3四種蛋白亞型。在卵丘細胞中， V2和V3蛋白的表達量均高于V0和V1（P<0.05），而V2與V3、V0與V1表達量的差異均無統(tǒng)計學意義；在小卵泡顆粒細胞中，V1、V2和V3的表達均高于V0（P<0.05），而V1、V2和V3兩兩之間表達量的差異均無統(tǒng)計學意義；在大卵泡顆粒細胞中，V1、V2和V3的表達均高于V0（P<0.05），但V1、V2和V3兩兩之間表達量的差異均無統(tǒng)計學意義。
　　V0、V2和V3蛋白

6、在卵丘細胞的表達量均明顯高于其在大卵泡和小卵泡顆粒細胞中的量（P<0.05），而在大卵泡和小卵泡顆粒細胞中表達量的差異均無統(tǒng)計學意義。V1蛋白在卵丘細胞中的表達量高于小卵泡顆粒細胞（P<0.05），而在大卵泡和小卵泡顆粒細胞、卵丘細胞和大卵泡顆粒細胞間的表達量均無統(tǒng)計學差異。大小卵泡的卵泡液中均主要存在V2和V3兩種蛋白亞型。
　　結論：Versican的四種亞型mRNA和蛋白在人卵泡顆粒細胞和卵丘細胞均有表達。其中，卵丘細胞是v

7、ersican的主要表達細胞，V0、V1、V2的mRNA和蛋白主要由卵丘細胞表達。而人卵泡液中主要存在V2和V3兩種亞型蛋白。Versican亞型在小卵泡和大卵泡顆粒細胞中的表達變化可能與其在卵泡發(fā)育過程中的功能變化有關。
　　第二部分:卵泡液中多能蛋白聚糖的檢測及臨床意義
　　目的：明確大卵泡液中versican含量與臨床妊娠結局的關系；確定大卵泡液中versican含量的可能影響因素，即研究不同促排卵方案對卵泡液vers

8、ican量的影響，多囊卵巢綜合癥（PCOS）、子宮內膜異位癥、卵巢反應不良（poor ovarian response，POR）等狀態(tài)是否影響卵泡液中versican含量，以及患者年齡、基礎FSH、卵泡液雌二醇（E2）和孕酮（P）、HCG日血清E2和P等與大卵泡液中versican含量的相關性。
　　方法：共收集327份大卵泡液，ELISA檢測卵泡液中versican含量，放射免疫試驗檢測卵泡液E2（180份）和P（162份）含量

9、。收集患者臨床信息并隨訪妊娠結局，確定大卵泡液中versican含量與妊娠結局的關系，并了解卵泡液中versican含量的影響因素，包括患者年齡、基礎FSH、促排卵方案、內分泌疾病、卵泡液中E2和P的含量等。
　　結果：獲得妊娠的臨床妊娠組為223例，未妊娠組為98例，妊娠組中已獲得活胎分娩的活產(chǎn)組159例，流產(chǎn)35例，繼續(xù)妊娠28例。妊娠組卵泡液中versican含量為1799.00±956.01 pg/ml，未妊娠組的含量為1

10、900.55±1040.10 pg/ml，兩者間差異無統(tǒng)計學意義；活產(chǎn)組卵泡液中 versican含量（1861.09±1004.19 pg/ml）與流產(chǎn)組（1769.89±897.56 pg/ml）間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　應用長方案患者組194例，超長方案組49例，拮抗劑方案組75例。長方案組卵泡液中versican含量（1989.46±1006.26 pg/ml）顯著高于拮抗劑方案組（1398.89±930

11、.46 pg/ml）（P<0.001），超長方案組卵泡液中 versican含量（1793.78±920.77 pg/ml）也高于拮抗劑組（P=0.028），而在長方案組與超長方案組間無統(tǒng)計學差異。PCOS患者組34例、內異癥患者組40例、POR患者組28例和對照組208例。PCOS患者組、內異癥組和POR患者組卵泡液versican含量與對照組間的差異均無統(tǒng)計學意義。
　　卵泡液versican含量與卵泡液E2以及HCG日E2含

12、量正相關，但與患者年齡、基礎FSH、卵泡液P和HCG日P均無相關性。
　　結論：大卵泡液中versican含量與試管嬰兒患者妊娠結局無關。長方案、超長方案和拮抗劑三種促排卵方案間卵泡液中versican含量存在明顯差異，提示不同的用藥方案對卵泡細胞，包括顆粒細胞和卵丘細胞的分泌活動產(chǎn)生了顯著不同的影響。而且卵泡液中versican的含量與卵泡液和血清中雌二醇的含量正相關，因此，卵泡液中versican的含量可能也是反映卵泡細胞功能