卵泡液中多能蛋白聚糖的檢測(cè)及臨床意義.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述:
　　第一部分:多能蛋白聚糖在人卵泡中的表達(dá)
　　目的：多能蛋白聚糖（versican）在維持卵泡結(jié)構(gòu)完整、卵泡發(fā)育、卵冠丘復(fù)合物擴(kuò)張及排卵中起重要作用。本研究目的是明確versican在人卵泡細(xì)胞中表達(dá)的亞型類(lèi)別，以及各種亞型的表達(dá)水平。
　　方法：收集臨床試管嬰兒患者的大卵泡（≥18mm）、小卵泡（≤10mm）的卵泡液，分離卵泡壁層顆粒細(xì)胞（以下簡(jiǎn)稱(chēng)為顆粒細(xì)胞），一部分細(xì)胞用于提取總

2、RNA，行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）；一部分細(xì)胞用于提取蛋白，行western blot實(shí)驗(yàn)。同時(shí)收集ICSI患者來(lái)源的卵丘顆粒細(xì)胞（以下均稱(chēng)為卵丘細(xì)胞），分別行qRT-PCR和western blot實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：qRT-PCR結(jié)果顯示，大卵泡和小卵泡顆粒細(xì)胞和卵丘細(xì)胞均表達(dá)versican的V0、V1、V2和V3四種亞型mRNA。在卵丘細(xì)胞和大卵泡顆粒細(xì)胞中V1表達(dá)均高于V0、V2和V3（P<0.05）；卵丘細(xì)胞

3、中V0和V2的表達(dá)量?jī)H次于V1，而V3含量最低；大卵泡顆粒細(xì)胞的V2表達(dá)水平高于V0和V3（P<0.05），V0和V3表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；在小卵泡顆粒細(xì)胞中，V2 mRNA表達(dá)量分別高于V0和V3（P<0.05），V1表達(dá)量高于V3（P<0.05），V2與V1、V1與V0、V0與V3表達(dá)量的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　V0和V1 mRNA在卵丘細(xì)胞中的表達(dá)量分別高于在大卵泡和小卵泡顆粒細(xì)胞中的量（P<0.05），而在

4、大、小卵泡顆粒細(xì)胞中的表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；V2在卵丘細(xì)胞中表達(dá)量高于大卵泡顆粒細(xì)胞（P<0.05），但V2在大卵泡顆粒細(xì)胞與小卵泡顆粒細(xì)胞、卵丘細(xì)胞與小卵泡顆粒細(xì)胞中表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；V3在大卵泡顆粒細(xì)胞中表達(dá)量高于卵丘細(xì)胞和小卵泡顆粒細(xì)胞（P<0.05），在卵丘細(xì)胞和小卵泡顆粒細(xì)胞中表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　Western blot結(jié)果顯示，卵泡顆粒細(xì)胞主要表達(dá)V1、V2和V3蛋白亞型，V0亞型的條帶均很弱，而卵丘細(xì)胞表達(dá)

5、V0、V1、V2和V3四種蛋白亞型。在卵丘細(xì)胞中， V2和V3蛋白的表達(dá)量均高于V0和V1（P<0.05），而V2與V3、V0與V1表達(dá)量的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在小卵泡顆粒細(xì)胞中，V1、V2和V3的表達(dá)均高于V0（P<0.05），而V1、V2和V3兩兩之間表達(dá)量的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在大卵泡顆粒細(xì)胞中，V1、V2和V3的表達(dá)均高于V0（P<0.05），但V1、V2和V3兩兩之間表達(dá)量的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　V0、V2和V3蛋白

6、在卵丘細(xì)胞的表達(dá)量均明顯高于其在大卵泡和小卵泡顆粒細(xì)胞中的量（P<0.05），而在大卵泡和小卵泡顆粒細(xì)胞中表達(dá)量的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。V1蛋白在卵丘細(xì)胞中的表達(dá)量高于小卵泡顆粒細(xì)胞（P<0.05），而在大卵泡和小卵泡顆粒細(xì)胞、卵丘細(xì)胞和大卵泡顆粒細(xì)胞間的表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大小卵泡的卵泡液中均主要存在V2和V3兩種蛋白亞型。
　　結(jié)論：Versican的四種亞型mRNA和蛋白在人卵泡顆粒細(xì)胞和卵丘細(xì)胞均有表達(dá)。其中，卵丘細(xì)胞是v

7、ersican的主要表達(dá)細(xì)胞，V0、V1、V2的mRNA和蛋白主要由卵丘細(xì)胞表達(dá)。而人卵泡液中主要存在V2和V3兩種亞型蛋白。Versican亞型在小卵泡和大卵泡顆粒細(xì)胞中的表達(dá)變化可能與其在卵泡發(fā)育過(guò)程中的功能變化有關(guān)。
　　第二部分:卵泡液中多能蛋白聚糖的檢測(cè)及臨床意義
　　目的：明確大卵泡液中versican含量與臨床妊娠結(jié)局的關(guān)系；確定大卵泡液中versican含量的可能影響因素，即研究不同促排卵方案對(duì)卵泡液vers

8、ican量的影響，多囊卵巢綜合癥（PCOS）、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢反應(yīng)不良（poor ovarian response，POR）等狀態(tài)是否影響卵泡液中versican含量，以及患者年齡、基礎(chǔ)FSH、卵泡液雌二醇（E2）和孕酮（P）、HCG日血清E2和P等與大卵泡液中versican含量的相關(guān)性。
　　方法：共收集327份大卵泡液，ELISA檢測(cè)卵泡液中versican含量，放射免疫試驗(yàn)檢測(cè)卵泡液E2（180份）和P（162份）含量

9、。收集患者臨床信息并隨訪妊娠結(jié)局，確定大卵泡液中versican含量與妊娠結(jié)局的關(guān)系，并了解卵泡液中versican含量的影響因素，包括患者年齡、基礎(chǔ)FSH、促排卵方案、內(nèi)分泌疾病、卵泡液中E2和P的含量等。
　　結(jié)果：獲得妊娠的臨床妊娠組為223例，未妊娠組為98例，妊娠組中已獲得活胎分娩的活產(chǎn)組159例，流產(chǎn)35例，繼續(xù)妊娠28例。妊娠組卵泡液中versican含量為1799.00±956.01 pg/ml，未妊娠組的含量為1

10、900.55±1040.10 pg/ml，兩者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；活產(chǎn)組卵泡液中 versican含量（1861.09±1004.19 pg/ml）與流產(chǎn)組（1769.89±897.56 pg/ml）間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　應(yīng)用長(zhǎng)方案患者組194例，超長(zhǎng)方案組49例，拮抗劑方案組75例。長(zhǎng)方案組卵泡液中versican含量（1989.46±1006.26 pg/ml）顯著高于拮抗劑方案組（1398.89±930

11、.46 pg/ml）（P<0.001），超長(zhǎng)方案組卵泡液中 versican含量（1793.78±920.77 pg/ml）也高于拮抗劑組（P=0.028），而在長(zhǎng)方案組與超長(zhǎng)方案組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。PCOS患者組34例、內(nèi)異癥患者組40例、POR患者組28例和對(duì)照組208例。PCOS患者組、內(nèi)異癥組和POR患者組卵泡液versican含量與對(duì)照組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　卵泡液versican含量與卵泡液E2以及HCG日E2含

12、量正相關(guān)，但與患者年齡、基礎(chǔ)FSH、卵泡液P和HCG日P均無(wú)相關(guān)性。
　　結(jié)論：大卵泡液中versican含量與試管嬰兒患者妊娠結(jié)局無(wú)關(guān)。長(zhǎng)方案、超長(zhǎng)方案和拮抗劑三種促排卵方案間卵泡液中versican含量存在明顯差異，提示不同的用藥方案對(duì)卵泡細(xì)胞，包括顆粒細(xì)胞和卵丘細(xì)胞的分泌活動(dòng)產(chǎn)生了顯著不同的影響。而且卵泡液中versican的含量與卵泡液和血清中雌二醇的含量正相關(guān)，因此，卵泡液中versican的含量可能也是反映卵泡細(xì)胞功能