葉酸對肝星狀細胞再程序化作用的研究.pdf

1、肝纖維化是肝臟損傷后的病理性修復(fù)反應(yīng)，其特征是肝臟中肝星狀細胞(hepaticStella cells，HSCs)激活、增殖和細胞外基質(zhì)蛋白過度沉積，本研究檢測了葉酸攝取相關(guān)基因在原代HSCs活化過程中的mRNA表達，發(fā)現(xiàn)Folr1基因的表達在HSC活化過程中持續(xù)性增強，而Slc19a1和Slc46a1的表達則表現(xiàn)出下降趨勢，這表明FR-α在HSCs攝取葉酸方面占據(jù)主導(dǎo)作用;葉酸是人體自身不能合成的必需物質(zhì)，在細胞的生長、分化、損傷修復(fù)

2、等方面起著重要作用。葉酸缺乏可影響多種細胞的增殖、凋亡和侵襲以及細胞表型改變。HSCs的活化是肝纖維化的關(guān)鍵，本研究采用不同濃度葉酸(0mg/L葉酸缺乏組、1 mg/L中濃度組、5mg/L高濃度組)處理HSC-T6細胞，研究葉酸對HSC-T6細胞的作用，探索葉酸能否抑制HSCs活化或者逆轉(zhuǎn)已活化HSCs至靜息態(tài)。
　　首先，通過CCK-8實驗，觀察到葉酸缺乏可以抑制HSC-T6細胞的生長;BrdU，AO/PI雙染色和流式細胞儀檢測

3、細胞凋亡實驗結(jié)果顯示葉酸缺乏抑制HSC-T6細胞生長是通過抑制HSC-T6細胞增殖和促進HSC-T6細胞凋亡實現(xiàn)的。細胞劃痕實驗顯示:葉酸缺乏可以抑制HSC-T6細胞遷移，這表明葉酸參與調(diào)控T6細胞的表型改變。
　　其次，通過QPCR和Western blotting實驗，本研究發(fā)現(xiàn)葉酸缺乏作用下HSC-T6細胞內(nèi)p-ERK1/2的表達顯著低于中濃度組和高濃度組，而ERK1/2的表達無顯著差異，這表明葉酸缺乏可通過下調(diào)ERK1/2

4、途徑中p-ER1/2的表達抑制HSC-T6細胞增殖;葉酸缺乏組中p-p53和p-p21的表達顯著高于其余兩組，而p53和p21的在不同濃度葉酸作用HSC-T6細胞內(nèi)的表達無顯著性差異。這表明葉酸缺乏通過上調(diào)p53信號通路中p-p53和p-p21的表達促進HSC-T6凋亡;葉酸缺乏組中細胞代謝相關(guān)基因a-SMA和Vimentin的表達顯著低于其余兩組，而E-cadherin顯著高于其余兩組，隨后我們研究了細胞代謝途徑中的關(guān)鍵蛋白PKM2的

5、表達，發(fā)現(xiàn)葉酸缺乏組中PKM2表達同樣顯著低于其余兩組，這表明葉酸缺乏上調(diào)上皮細胞標志物E-cadherin的表達及下調(diào)間葉細胞標志α-SMA、Vimentin和PKM2等蛋白表達而表現(xiàn)出MET轉(zhuǎn)變。
　　CCN蛋白因子是具信號傳遞功能的細胞基質(zhì)蛋白，參與組織修復(fù)反應(yīng)并涉及肝纖維化發(fā)生發(fā)展。本研究在制備了高純度的大鼠原代HSCs并通過體外培養(yǎng)進行激活的基礎(chǔ)上，同步定量分析了6個CCN因子在激活過程中的表達，對CCN因子在HSCs激