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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:分離獲取高產(chǎn)量、高活性、高純度的肝星狀細(xì)胞。 方法:用原位膠原酶循環(huán)灌流,密度梯度離心法分離純化大鼠肝星狀細(xì)胞,用含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞并傳代。 結(jié)果:肝星狀細(xì)胞得率為5-6×107個(gè)/鼠,純度>97%,存活率>92%。 結(jié)論:分離出的大鼠肝星狀細(xì)胞產(chǎn)量高、活性高、純度高。 目的:以秋水仙堿為對(duì)照藥物觀察四種中藥單體對(duì)肝星狀細(xì)胞的作用。 方法:采用原位循環(huán)灌流法分離提純肝
2、星狀細(xì)胞(HSC),經(jīng)鑒定后傳代培養(yǎng)做MTT試驗(yàn),觀察藥物對(duì)HSC活化增殖的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物對(duì)HSC增殖周期的影響;丫啶橙(A0)/溴乙錠(EB)熒光染色法測(cè)藥物對(duì)HSC凋亡的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藥物對(duì)HSC凋亡的影響;免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察藥物對(duì)I、III型膠原蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果:上述五種藥物都有抑制傳代HSC活化增殖的作用,以秋水仙堿,丹參素、黃芩甙作用相對(duì)明顯;流式細(xì)胞儀分析顯示五種藥物對(duì)傳代的HSC增殖周期都
3、有影響,以丹參素、黃芪,黃芩甙相對(duì)明顯;流式細(xì)胞儀熒光染色法:發(fā)現(xiàn)丹參素,秋水仙堿,黃芩甙在GO-G1期前出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰。A0/EB熒光染色法檢測(cè)得出丹參素、黃芩甙,秋水仙堿的細(xì)胞凋亡率高;免疫細(xì)胞化學(xué)染色法分析得出五種藥物對(duì)I型膠原表達(dá)抑制明顯,前三位依次是黃芪、丹參素、黃芩甙;對(duì)III型膠原表達(dá)抑制明顯,前三位依次是丹參素、黃芪、黃芩甙。 結(jié)論:上述四種中藥單體中以丹參素抑制HSC活化增殖,促進(jìn)凋亡,抑制HSC的III
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