白細(xì)胞介素-22經(jīng)Wnt-β-catenin通路抑制肝星狀細(xì)胞致纖維化作用.pdf

1、目的：研究IL-22抑制肝星狀細(xì)胞致肝纖維化的作用和機(jī)制，探索Wnt/β-catenin通路在肝星狀細(xì)胞激活過程中的作用，進(jìn)一步明確IL-22是否經(jīng)抑制Wnt/β-catenin通路發(fā)揮抗肝纖維化的作用。
　　方法：采用TGF-β1激活肝星狀細(xì)胞，分別使用0、2.5 ng/mL、5 ng/mL濃度的TGF-β1干預(yù)肝星狀細(xì)胞48 h，熒光定量PCR和Western-blot檢測干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)β-catenin和α-SMAmRNA和蛋

2、白水平變化。分別使用0、250pg/mL、500 pg/mL、750 pg/mL、1000 pg/mL濃度IL-22干預(yù)肝星狀細(xì)胞48h后，CCK8法檢測細(xì)胞的增殖情況。再以1000 pg/mL濃度IL-22分別干預(yù)肝星狀細(xì)胞12h、24 h、36 h、48 h，CCK8法以及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的增殖和凋亡情況。以1000 pg/mL濃度IL-22干預(yù)肝星狀細(xì)胞48h后，檢測干預(yù)后肝星狀細(xì)胞增殖率;再采用5 ng/mL濃度的TGF-β1

3、預(yù)處理肝星狀細(xì)胞24h，然后給予1000 pg/mL濃度的IL-22干預(yù)肝星狀細(xì)胞48 h，再次檢測細(xì)胞增殖率，對比激活肝星狀細(xì)胞前后細(xì)胞增殖率被IL-22抑制情況。以1000 pg/mL濃度IL-22干預(yù)肝星狀細(xì)胞48h后，檢測細(xì)胞內(nèi)的β-catenin、α-SMA mRNA和蛋白表達(dá)水平;再采用5 ng/mL濃度的TGF-β1預(yù)處理肝星狀細(xì)胞24h，然后給予1000 pg/mL濃度的IL-22干預(yù)肝星狀細(xì)胞48 h，再次檢測細(xì)胞內(nèi)的

4、β-catenin、α-SMAmRNA和蛋白表達(dá)水平。對比干預(yù)前后肝星狀細(xì)胞β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：TGF-β1激活肝星狀細(xì)胞后結(jié)果顯示β-catenin和α-SMA mRNA和蛋白水平均隨著TGF-β1濃度增加而升高（P＜0.05），提示肝星狀細(xì)胞激活過程中伴隨著Wnt/β-catenin通路激活和α-SMA表達(dá)改變。不同濃度IL-22干預(yù)后顯示肝星狀細(xì)胞增殖率隨著IL-22濃度增

5、加呈下降趨勢，到750pg/mL時(shí)的細(xì)胞增殖率顯著大于0 pg/mL(P＜0.05);再以同一濃度IL-22分別干預(yù)肝星狀細(xì)胞不同時(shí)間，結(jié)果顯示肝星狀細(xì)胞增殖率隨IL-22干預(yù)時(shí)間增加呈下降趨勢，在干預(yù)后48h最顯著（P＜0.05），肝星狀細(xì)胞凋亡率隨著IL-22濃度增加呈升高趨勢，但各個(gè)濃度組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05），且IL-22干預(yù)的各時(shí)間段之間細(xì)胞凋亡率差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。對比IL-22干預(yù)肝星狀細(xì)胞前后

6、，干預(yù)后肝星狀細(xì)胞增殖率顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;對比IL-22干預(yù)TGF-β1激活前后的肝星狀細(xì)胞細(xì)胞增殖率，結(jié)果顯示IL-22對激活后細(xì)胞增殖率抑制更顯著（P＜0.05）。對比IL-22干預(yù)TGF-β1激活前后的肝星狀細(xì)胞細(xì)胞β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示IL-22對激活后肝星狀細(xì)胞細(xì)胞β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)的抑制作用更顯著(P＜0.05)。