糖類標記試劑在高效液相色譜-質(zhì)譜中的應(yīng)用.pdf

1、糖類物質(zhì)是自然界儲量最為豐富的一大類有機化合物，是除蛋白和核酸之外的又一類重要的生物大分子。但人們對糖類物質(zhì)的生物學(xué)研究遠遠落后于前兩者，主要是因為糖的種類多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜且多為異構(gòu)體，存在著微觀不均一性。通常單糖、寡糖僅在基團-CHOH構(gòu)型排列上有所不同，采用常規(guī)方法對其分離較為困難。糖在紫外區(qū)無吸收，采用示差折光檢測時，靈敏度低。糖類化合物的分析存在分離和檢測兩大難題，為此常采用衍生化處理，將糖類組分轉(zhuǎn)變?yōu)閹Оl(fā)色基團的分子，改變糖分子的

2、局部結(jié)構(gòu)，從而可以在高效液相色譜柱上實現(xiàn)分離，隨之進行紫外或熒光檢測。目前已有大量標記試劑被用于糖類化合物的衍生化，但在實際應(yīng)用中大都存在著這樣或那樣的缺點，因此開發(fā)高靈敏的標記試劑意義重大。本文重點研究了幾種糖類化合物標記試劑的合成和表征，考察了標記試劑的光譜性質(zhì)，優(yōu)化了衍生反應(yīng)條件和色譜分離條件，運用新型標記試劑建立了高效液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-MS)分析糖類化合物的新方法，并將建立的方法應(yīng)用于實際樣品的分析。具體工作如下：

3、 第一章：綜述了糖類化合物分析的現(xiàn)狀。介紹了糖類的結(jié)構(gòu)特點及分析工作的難點，現(xiàn)代分離技術(shù)(氣相色譜、高效液相色譜和毛細管電泳)在糖類分離中的應(yīng)用情況，糖類化合物的檢測手段，糖類衍生化的分類及常用衍生試劑，以及糖類化合物質(zhì)譜分析的現(xiàn)狀。 第二章：兩種標記試劑：1-(2-萘基)-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)，1，2-苯并咔唑-9-乙氧基碳酰胼(BCECH)的設(shè)計合成、結(jié)構(gòu)表征、光譜性質(zhì)研究。通過對比新型試劑與以往試劑的光譜性質(zhì)

4、和結(jié)構(gòu)差異，預(yù)測其在改善分離和提高檢測靈敏度等方面的可行性。 第三章：以新型標記試劑NMP作為柱前衍生試劑，建立了簡單、靈敏的糖類組分的反相高效液相色譜測定方法。對實際花粉多糖樣品的單糖組成進行測定，檢驗所建立方法的可行性。將NMP與傳統(tǒng)試劑對比研究，總結(jié)了吡唑啉酮類衍生物在HPLC-ESI-MS分析中的規(guī)律性內(nèi)容：根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)提出了該類衍生反應(yīng)的機理；色譜出峰順序規(guī)律并給出了相應(yīng)解釋；電噴霧質(zhì)譜裂解模式及其原因；全面比較了三者