卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對樹突狀細胞成熟及免疫調(diào)節(jié)功能的影響.pdf

1、卵轉(zhuǎn)鐵蛋白(OVT)是禽蛋蛋清蛋白中主要的成分，具有多種生物活性。OVT通過抗原遞呈細胞進行外來物質(zhì)（抗原）的吞噬處理和遞呈作用，傳遞信息給免疫細胞，激活機體的先天性免疫系統(tǒng)，調(diào)節(jié)免疫細胞因子的產(chǎn)生，影響淋巴細胞增殖、T細胞的成熟與分化，在生物體內(nèi)發(fā)揮著增強免疫功能、抵抗細菌和病毒感染的作用。樹突狀細胞(DCs)作為體內(nèi)最強的抗原提呈細胞，能夠?qū)⒓毎麅?nèi)外抗原特異性呈遞給幼稚型T細胞，引發(fā)機體免疫反應(yīng)。目前尚未見OVT對DCs發(fā)育、成熟、

2、遷移及免疫調(diào)節(jié)分子等的影響報道。本文通過體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源樹突狀細胞，流式細胞儀檢測不同濃度OVT刺激下DCs表面特征性分子表達量，ELISA測定細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子水平變化，MLRs測定成熟DCs引發(fā)同種異體小鼠脾臟T細胞增殖效果，Western-blot測定MAPK通路下p38MAPK、JNK和ERK以及它們的磷酸化蛋白含量，探討OVT對DCs成熟和免疫調(diào)節(jié)的影響，為后續(xù)的試驗提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　(1)不同

3、濃度(10、25、50、100、200μg/mL)OVT單獨刺激DCs48h后，均能顯著提高DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表達量，促進DCs的成熟；不同濃度OVT與LPS共同刺激DCs48h后，10～25μg/mL(低濃度) OVT刺激的DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表達量顯著高于陽性對照組(LPS單獨刺激組)，表現(xiàn)為協(xié)同LPS刺激效果，25～200μg/mL(高濃度)OVT刺激的DCs表面CD80、CD

4、40和MHC-II分子表達量顯著低于陽性對照組，表現(xiàn)為拮抗LPS刺激效果。因而，OVT單獨刺激或與LPS共刺激DCs均表現(xiàn)出促進DCs成熟的效果，但共刺激下高濃度會減弱DCs的成熟度。
　　(2)不同濃度OVT單獨刺激成熟的DCs均能夠引發(fā)同種異體小鼠脾臟T淋巴細胞增殖，不同濃度OVT在DCs：T細胞=1:25時，T細胞增殖率最高；LPS與不同濃度OVT共同刺激成熟的DCs在低濃度OVT時能顯著引發(fā)T細胞增殖，但高濃度OVT對T細

5、胞的增殖無顯著影響。以上結(jié)果表明，OVT單獨刺激或低濃度與LPS共刺激成熟的DCs顯著引發(fā)T淋巴細胞增殖，但高濃度共刺激DCs無引發(fā)T細胞增殖的能力。
　　(3)不同濃度OVT單獨刺激DCs48h后，DCs培養(yǎng)上清液中TNF-α含量隨濃度增加而升高，但在200μg/mL時，顯著下降；IL-10的表達量在200μg/mL時達到最大；IL-12p70的表達量不依賴OVT的劑量，在細胞上清液中大量存在，且與對照組無顯著差異，表明OVT單

6、獨刺激下促炎反應(yīng)占主導(dǎo)，在濃度最高時抗炎反應(yīng)起主導(dǎo)作用，抑制炎癥的繼續(xù)發(fā)展，但IL-12p70的表達量呈現(xiàn)不依賴OVT濃度。
　　(4) LPS與不同濃度OVT共刺激DCs48h，細胞上清中TNF-α含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，25μg/mL OVT為轉(zhuǎn)折點。IL-10含量隨OVT濃度增加上調(diào)，在OVT濃度為200μg/mL時達到最大，共刺激DCs產(chǎn)生的IL-12p70顯著高于單獨刺激各組，但共刺激組別間無顯著差異。表明OVT與L

7、PS共刺激下低濃度時主要發(fā)生促炎反應(yīng)，高濃度時抗炎反應(yīng)占主導(dǎo)地位且依賴OVT濃度，IL-12p70總體呈現(xiàn)不依賴共刺激物，但顯著高于OVT單獨刺激組的釋放量。
　　(5)25μg/mL OVT單獨刺激DCs一定時間(4h、8h、12h)后，檢測MAPK信號路徑下的p38MAPK、ERK、JNK及它們的磷酸化蛋白表達量，結(jié)果表明：OVT單獨刺激DCs時，ERK、p-ERK表達量下調(diào)，p-p38MAPK、JNK，p-JNK表達量上調(diào)，