靶向CD138嵌合抗原受體的表達(dá)優(yōu)化及其對(duì)多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞殺傷影響.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)是第二常見(jiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，克隆性漿細(xì)胞在骨髓及髓外病灶積聚，并最終引起腎衰竭，免疫抑制伴反復(fù)感染，貧血以及骨質(zhì)損傷。盡管MM的治療有了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但至今仍是不可治愈的惡性疾病，絕大多數(shù)的患者最終會(huì)復(fù)發(fā)或進(jìn)展。嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞(Chimeric antigen receptors modified T cells，CAR-T)已成為當(dāng)下腫瘤免疫治療和靶向治療的研究熱點(diǎn)，尤其

2、是靶向CD19 CAR-T細(xì)胞治療在CD19陽(yáng)性B細(xì)胞惡性腫瘤中取得的顯著療效。CARs技術(shù)在MM治療領(lǐng)域的應(yīng)用研究可能為MM患者的預(yù)后帶來(lái)新的希望。
　　目的:本研究選擇了CD138作為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)對(duì)應(yīng)的CAR結(jié)構(gòu)，通過(guò)更換具有更高表達(dá)活性的啟動(dòng)子優(yōu)化載有CAR基因片段的基因載體，增加CARs的表達(dá)水平，比較優(yōu)化前后的CAR-T細(xì)胞對(duì)CD138陽(yáng)性MM細(xì)胞系RPMI8226的殺傷活性。
　　方法:(1)構(gòu)建載有CAR基因及不同

3、啟動(dòng)子的基因載體;(2)驗(yàn)證啟動(dòng)子對(duì)下游CAR基因的表達(dá)活性;(3)制備優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR-T細(xì)胞、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè);(4)將靶向CD138 CAR-T細(xì)胞與RPMI8226細(xì)胞共培養(yǎng)、檢測(cè)殺傷活性。
　　結(jié)果:(1)成功構(gòu)建了本試驗(yàn)所需要的基因載體;(2)優(yōu)化后基因載體具有更高表達(dá)活性;(3)成功制備了優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR-T細(xì)胞，陽(yáng)性率分別為13.32％與10.16％;(4)在不同效靶比的情況下，C

4、AR-T組的殺傷活性均高于CIK組，且P＜0.05，具有顯著差異;不同效靶比下，PWPXL-CAR-T組的殺傷活性均高于PWPT-CAR-T組，T檢驗(yàn)P＞0.05，差異不顯著。
　　結(jié)論:(1)啟動(dòng)子EF-1α比EF-1α-short具有更高的表達(dá)活性，可以用于增加CAR-T細(xì)胞表面CARs的表達(dá)水平，說(shuō)明在啟動(dòng)子水平優(yōu)化CAR基因載體以提高細(xì)胞表面CARs表達(dá)水平是可行的;(2)本研究成功制備了優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR