噻嗎洛爾對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞RPMI8226增殖的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：本研究旨在探討噻嗎洛爾對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞RPMI8226增殖與凋亡的影響，并探索其可能作用的分子機(jī)制，從而為多發(fā)性骨髓瘤的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:培養(yǎng)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8226,在培養(yǎng)的細(xì)胞中加入不同濃度噻嗎洛爾,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法檢測(cè)噻嗎洛爾對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的抑制率并篩選研究濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度噻嗎洛爾誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞的凋亡情況；同時(shí)利用qRT-PCR和蛋白印跡

2、技術(shù)分別檢測(cè)噻嗎洛爾作用后RPMI8226細(xì)胞中caspase-3、caspase-9、Bax和Bcl-2基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)情況,并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：MTT顯示，噻嗎洛爾作用RPMI8226細(xì)胞后，該細(xì)胞活力呈抑制效應(yīng)，且在相同藥物作用時(shí)間前提下，抑制率隨藥物濃度的升高而增加，具有明顯的濃度依賴性（r=0.548, P=0.019）；同時(shí)，在相同藥物濃度作用前提下，抑制率隨藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，

3、具有明顯的時(shí)間依賴性（r=0.659, P=0.003）；綜上，噻嗎洛爾對(duì)RPMI8226細(xì)胞呈抑制作用，且抑制率呈濃度—時(shí)間依賴性。流式細(xì)胞術(shù)顯示，噻嗎洛爾作用RPMI8226細(xì)胞72h后，2.5μmol/L、20μmol/L、50μmol/L噻嗎洛爾作用組細(xì)胞凋亡率分別為(7.17±0.06)％、(10.56±0.65)%、(15.27±0.86)%，與對(duì)照組(3.93±0.25)%相比均明顯升高(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

4、，且細(xì)胞凋亡率隨藥物作用濃度增加而升高，具有濃度依賴性（r=0.953, P=0.047）。qRT-PCR示，噻嗎洛爾作用RPMI8226細(xì)胞72h后能夠顯著上調(diào)Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表達(dá)，顯著下調(diào)Bcl-2的mRNA表達(dá)(P＜0.05)。Western Blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比20μmol/L噻嗎洛爾作用于RPMI8226細(xì)胞72h后，Bax蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意