上海市鼠傷寒沙門(mén)氏菌的耐藥性及耐藥基因研究.pdf_第1頁(yè)
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1、沙門(mén)氏菌是引起食源性疾病的常見(jiàn)病原菌之一,每年全球因感染沙門(mén)氏菌而引起胃腸炎的患者高達(dá)9380萬(wàn),其中死亡人數(shù)約15.5萬(wàn),且大部分的疫情爆發(fā)是通過(guò)被沙門(mén)氏菌污染的食物或者動(dòng)物傳播的,嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生健康問(wèn)題,并且造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前沙門(mén)氏菌共發(fā)現(xiàn)2500多種血清型,鼠傷寒沙門(mén)氏菌是常見(jiàn)血清型之一,由鼠傷寒沙門(mén)氏菌在全球范圍內(nèi)引起的肆虐感染事件也令人印象深刻。因此,本研究開(kāi)展了對(duì)上海市鼠傷寒沙門(mén)氏菌的病原監(jiān)測(cè)及相關(guān)的研究。

2、  從2011年1月至2014年12月共收集上海市鼠傷寒沙門(mén)氏菌641株,其中食源性菌株82株,臨床來(lái)源菌株559株。臨床來(lái)源菌株分析顯示,各年齡段人群均有感染者,但是5歲以下兒童,尤其是一歲以內(nèi)兒童更易感染鼠傷寒沙門(mén)氏菌,占感染者的49.4%,男性患者與女性患者的比例為1.3:1,每年鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染高峰集中在夏秋兩季。
  為分析上海市鼠傷寒沙門(mén)氏菌的耐藥特點(diǎn),本研究對(duì)收集來(lái)的所有菌株進(jìn)行了抗生素敏感性檢測(cè)。結(jié)果顯示,菌株對(duì)

3、傳統(tǒng)抗生素均表現(xiàn)很高的耐藥率,從高到低依次為四環(huán)素(85%)、萘啶酸(81.6%)、氨芐西林(81.1%)、磺胺異噁唑(79.3%)、氯霉素(58.2%)、鏈霉素(54.6%)、甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲噁唑(50%)和慶大霉素(39.8%)。此外,在氟喹諾酮類藥物中,對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率為12.8%;在頭孢類藥物中,對(duì)頭孢噻呋,頭孢曲松和頭孢西丁的耐藥率分別為17.6%、17.6%和4.4%;在大環(huán)內(nèi)酯類藥物中,阿奇霉素的耐藥率為5%。食源性

4、菌株和臨床來(lái)源菌株耐藥性結(jié)果比較顯示,食源性菌株對(duì)萘啶酸、四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素、磺胺異噁唑和甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲噁唑的耐藥率高于臨床來(lái)源菌株,但臨床來(lái)源菌株對(duì)頭孢噻呋,頭孢曲松和頭孢西林耐藥性高于食源性菌株,兩者對(duì)環(huán)丙沙星和阿奇霉素的耐藥性無(wú)明顯差異。值得關(guān)注的是,僅有26株菌對(duì)所有抗生素均敏感,多重耐藥菌株高達(dá)86.1%,對(duì)≥3、≥4、≥5、≥6和≥7類抗生素產(chǎn)生耐藥的比例依次為86.1%、79.9%、64.3%、41.3%和0.

5、9%,其中30.4%的菌株耐藥譜為 ACSSuT(氨芐西林、氯霉素、鏈霉素、磺胺異噁唑和四環(huán)素)。此外還發(fā)現(xiàn)22株多重耐藥菌株對(duì)頭孢類藥物和環(huán)丙沙星同時(shí)耐藥,其中6株菌對(duì)阿奇霉素同時(shí)耐藥。如果這些多重耐藥菌株像DT104型菌株一樣在全球廣泛傳播的話后果不堪設(shè)想,應(yīng)該引起我們高度重視。通過(guò)上述藥敏結(jié)果分析,為上海市臨床使用抗生素治療鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染提供依據(jù),并提醒我們應(yīng)合理規(guī)范使用抗生素,避免耐藥菌株數(shù)量繼續(xù)增加。
  為研究鼠傷

6、寒沙門(mén)氏菌對(duì)頭孢類藥物、環(huán)丙沙星和阿奇霉素的耐藥機(jī)制,本研究對(duì)這三類藥物常見(jiàn)的耐藥基因進(jìn)行了PCR檢測(cè)。在82株耐環(huán)丙沙星的鼠傷寒沙門(mén)氏菌中,76株菌的gyrA基因存在單位點(diǎn)突變(Asp87Asn/Tyr)或者雙位點(diǎn)突變(Ser83Phe,Asp87Asn/Gly),其中6株菌同時(shí)存在parC單點(diǎn)突變(Ser80Arg),1株菌同時(shí)存在parC雙位點(diǎn)突變(Thr57Ser,Ser80Arg)。所有菌株gyrB和parC均未發(fā)生位點(diǎn)突變。

7、質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類藥物耐藥基因(PMQR)結(jié)果顯示,54(65.9%)菌株含有aac(6’)-Ib-cr基因,6(7.3%)株菌含有qnrB基因,其中2株為qnrB2,4株為qnrB4,僅1株菌含有qnrS1。值得關(guān)注的是有53株菌的gyrA基因有一個(gè)或者沒(méi)有突變位點(diǎn),但均帶有一種以上PMQR,說(shuō)明PMQR基因在介導(dǎo)鼠傷寒沙門(mén)氏菌對(duì)環(huán)丙沙星耐藥中有流行的趨勢(shì)。在116株耐頭孢類藥物的鼠傷寒沙門(mén)氏菌中,廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)基因普

8、遍存在,其中 blaCTX-M、blaTEM-1、blaOXA-1和blaSHV-12陽(yáng)性率分別為64.7%、44.8%、37.1%和2.6%。blaCTX-M共檢測(cè)到8種型別:blaCTX-M-14、blaCTX-M-15、blaCTX-M-27、blaCTX-M-55、blaCTX-M-65和blaCTX-M-104, blaCTX-M-123和blaCTX-M-125,均屬于blaCTX-M-1群和blaCTX-M-9群,未檢出b

9、laCTX-M-2/8/25基因,陽(yáng)性率最高的為blaCTX-M-14和 blaCTX-M-55,分別占29%和41%,此外blaCTX-M-123和 blaCTX-M-125基因在鼠傷寒沙門(mén)氏菌中首次發(fā)現(xiàn)。在32株耐阿奇霉素鼠傷寒沙門(mén)氏菌中,有15株MIC≥128μg/mL,均檢測(cè)到mphA基因,而其余17株MIC值為16-64μg/mL,均未檢測(cè)到mphA基因,其余大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因mphB、ermA、ermB、ereA、mefA和

10、msrA在32株菌中均未發(fā)現(xiàn),推測(cè)mphA基因可能介導(dǎo)鼠傷寒沙門(mén)氏菌對(duì)阿奇霉素的高水平耐藥。在22株共同耐頭孢類藥物和環(huán)丙沙星的鼠傷寒沙門(mén)氏菌中,共15株菌同時(shí)帶有ESBLs和PMQR基因,其中還有2株菌對(duì)阿奇霉素產(chǎn)生共同耐藥,攜帶耐藥基因?yàn)閍ac(6’)-Ib-cr/ blaCTX-M/blaTEM/ mphA。這些質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因極易在細(xì)菌間水平傳播,造成細(xì)菌的多重耐藥,因此應(yīng)積極關(guān)注這些基因的播散,并研究其傳播機(jī)制和途徑等,阻止

11、它們的擴(kuò)散。
  為了進(jìn)一步了解上海市鼠傷寒沙門(mén)氏菌的親緣關(guān)系及遺傳多態(tài)性,本研究利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)方法對(duì)257株鼠傷寒沙門(mén)氏菌進(jìn)行了基因分型,聚類分析結(jié)果顯示食源性菌株與臨床來(lái)源菌株親緣關(guān)系相近,在 A簇中兩種來(lái)源菌株之間帶型相似度為85%,說(shuō)明食源性菌株是人類感染鼠傷寒沙門(mén)氏菌的重要環(huán)節(jié)。對(duì)耐頭孢類藥物、環(huán)丙沙星和阿奇霉素的菌株進(jìn)行了基因分型,聚類分析結(jié)果顯示對(duì)這三類藥物耐藥的菌株帶型復(fù)雜,遺傳多態(tài)性明顯,帶型為C

12、EP.022的菌株均帶有blaCTX-M和blaTEM基因,且2011-2014年均有分布,表明此帶型菌株親緣關(guān)系極近,來(lái)自同一克隆群,且這些菌株均對(duì)7種以上抗生素耐藥,所以極易引起廣泛傳播,應(yīng)對(duì)此類型菌株加強(qiáng)監(jiān)控,其余耐藥基因與菌株基因分型無(wú)明顯相關(guān)性。
  綜上所述,本研究分析了上海市2011-2014年鼠傷寒沙門(mén)氏菌的耐藥特點(diǎn),闡述了菌株對(duì)頭孢類藥物、氟喹諾酮類藥物和阿奇霉素的耐藥機(jī)制,并利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳對(duì)耐藥菌株進(jìn)行基因

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