臨床分離非傷寒沙門菌耐藥性和對(duì)頭孢曲松耐藥機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:
　　研究天津地區(qū)急性腹瀉患者糞便標(biāo)本分離的非傷寒沙門菌（NTS）對(duì)常用抗菌藥物的敏感性，對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株進(jìn)行分子分型和超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）基因、頭孢菌素酶（AmpC）酶基因檢測(cè)，了解其對(duì)頭孢曲松耐藥的機(jī)制，為本地區(qū)治療非傷寒沙門菌感染臨床合理使用抗菌藥物和預(yù)防控制提供依據(jù)。
　　方法:
　　1.菌株的分離鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn)：對(duì)2014年5-10月間就診于天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院和天津醫(yī)科

2、大學(xué)總醫(yī)院腸道門診的急性腹瀉患者的糞便標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，采用生化鑒定、血清學(xué)鑒定并結(jié)合PCR檢測(cè)invA基因確定非傷寒沙門菌。采用K-B法對(duì)所有的非傷寒沙門菌菌株進(jìn)行11種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)，對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株進(jìn)一步檢測(cè)對(duì)阿奇霉素的敏感性。
　　2.PFGE和 MLST：對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）和多位點(diǎn)序列分型（MLST）的方法進(jìn)行分子分型鑒定。PFGE采用限制性內(nèi)切酶XbaI酶切，獲得聚

3、類分析圖譜；MLST將擴(kuò)增沙門菌的7個(gè)管家基因(thrA, purE, sucA, hisD, aroC, hemD, dnaN)，將測(cè)序結(jié)果與國(guó)際數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站比較后獲得等位基因圖譜和ST型。
　　3.ESBLs和 AmpC酶基因的檢測(cè)：對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增 ESBLs基因（TEM、SHV、CTX-M、OXA）和 AmpC酶基因（ACC、CMY），獲得陽性結(jié)果后進(jìn)行DNA序列分析。
　　結(jié)果:

4、r>　　1.生化鑒定和血清學(xué)鑒定結(jié)果與PCR擴(kuò)增invA基因的鑒定結(jié)果一致，共分離得到非重復(fù)非傷寒沙門菌108株，88株來自天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，20株來自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院。
　　2.108株非傷寒沙門菌中，多重耐藥率達(dá)到17.6％。對(duì)萘啶酸、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、頭孢曲松和厄他培南的敏感率依次為61.10%、68.50%、66.70%、97.10%和100.00%。
　　3.發(fā)現(xiàn)了3株頭孢曲松不敏感菌株。其中2株頭孢曲松

5、耐藥株為腸炎沙門菌Sa8709和Sa8771，1株頭孢曲松中介株為鼠傷寒沙門菌Sa8763，都是多重耐藥株。Sa8709分離自天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，對(duì)氨芐西林、萘啶酸、頭孢曲松和阿奇霉素耐藥，對(duì)環(huán)丙沙星中介耐藥；Sa8771分離自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，對(duì)氨芐西林、鏈霉素、萘啶酸、頭孢曲松、頭孢他啶耐藥，對(duì)環(huán)丙沙星和左氧氟沙星中介耐藥；Sa8763分離自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，對(duì)氨芐西林、萘啶酸、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素、四環(huán)素和阿奇霉素耐

6、藥，對(duì)頭孢曲松中介耐藥。
　　4.Sa8709、Sa8771和Sa8763的PFGE帶型不同，聚類分析顯示Sa8709和Sa8771相似度較高，為91.70%，與Sa8763相似度較低，為55.80%。經(jīng)MLST分型后，Sa8709、Sa8771為ST11型，Sa8763為ST34型。
　　5.Sa8709擴(kuò)增出符合預(yù)期長(zhǎng)度的CTX-M基因片段，Sa8771擴(kuò)增出符合預(yù)期長(zhǎng)度的CTX-M基因片段和TEM基因片段，Sa8763

7、擴(kuò)增出符合預(yù)期長(zhǎng)度的OXA基因片段，測(cè)序結(jié)果經(jīng)與對(duì)應(yīng)的基因序列GenBank對(duì)比后相似性均在98%以上。
　　結(jié)論:
　　1.本地區(qū)臨床分離的非傷寒沙門菌呈現(xiàn)一定程度的多重耐藥性，未發(fā)現(xiàn)對(duì)碳青霉烯類耐藥。
　　2.本地區(qū)臨床分離的非傷寒沙門菌對(duì)氟喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星和左氧氟沙星的敏感性低于70%，應(yīng)考慮重新評(píng)估氟喹諾酮類藥物是否仍適于非傷寒沙門菌感染的經(jīng)驗(yàn)治療和細(xì)菌感染性腹瀉的經(jīng)驗(yàn)治療。
　　3.本地區(qū)出現(xiàn)了攜帶