臨床分離非傷寒沙門菌耐藥性和對頭孢曲松耐藥機制的初步研究.pdf

1、目的:
　　研究天津地區(qū)急性腹瀉患者糞便標本分離的非傷寒沙門菌（NTS）對常用抗菌藥物的敏感性，對頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株進行分子分型和超廣譜β內酰胺酶（ESBLs）基因、頭孢菌素酶（AmpC）酶基因檢測，了解其對頭孢曲松耐藥的機制，為本地區(qū)治療非傷寒沙門菌感染臨床合理使用抗菌藥物和預防控制提供依據。
　　方法:
　　1.菌株的分離鑒定和抗菌藥物敏感性試驗：對2014年5-10月間就診于天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院和天津醫(yī)科

2、大學總醫(yī)院腸道門診的急性腹瀉患者的糞便標本進行培養(yǎng)，采用生化鑒定、血清學鑒定并結合PCR檢測invA基因確定非傷寒沙門菌。采用K-B法對所有的非傷寒沙門菌菌株進行11種抗菌藥物的敏感性試驗，對頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株進一步檢測對阿奇霉素的敏感性。
　　2.PFGE和 MLST：對頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株采用脈沖場凝膠電泳（PFGE）和多位點序列分型（MLST）的方法進行分子分型鑒定。PFGE采用限制性內切酶XbaI酶切，獲得聚

3、類分析圖譜；MLST將擴增沙門菌的7個管家基因(thrA, purE, sucA, hisD, aroC, hemD, dnaN)，將測序結果與國際數據庫網站比較后獲得等位基因圖譜和ST型。
　　3.ESBLs和 AmpC酶基因的檢測：對頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株采用聚合酶鏈式反應擴增 ESBLs基因（TEM、SHV、CTX-M、OXA）和 AmpC酶基因（ACC、CMY），獲得陽性結果后進行DNA序列分析。
　　結果:

4、r>　　1.生化鑒定和血清學鑒定結果與PCR擴增invA基因的鑒定結果一致，共分離得到非重復非傷寒沙門菌108株，88株來自天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院，20株來自天津醫(yī)科大學總醫(yī)院。
　　2.108株非傷寒沙門菌中，多重耐藥率達到17.6％。對萘啶酸、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、頭孢曲松和厄他培南的敏感率依次為61.10%、68.50%、66.70%、97.10%和100.00%。
　　3.發(fā)現了3株頭孢曲松不敏感菌株。其中2株頭孢曲松

5、耐藥株為腸炎沙門菌Sa8709和Sa8771，1株頭孢曲松中介株為鼠傷寒沙門菌Sa8763，都是多重耐藥株。Sa8709分離自天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院，對氨芐西林、萘啶酸、頭孢曲松和阿奇霉素耐藥，對環(huán)丙沙星中介耐藥；Sa8771分離自天津醫(yī)科大學總醫(yī)院，對氨芐西林、鏈霉素、萘啶酸、頭孢曲松、頭孢他啶耐藥，對環(huán)丙沙星和左氧氟沙星中介耐藥；Sa8763分離自天津醫(yī)科大學總醫(yī)院，對氨芐西林、萘啶酸、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素、四環(huán)素和阿奇霉素耐

6、藥，對頭孢曲松中介耐藥。
　　4.Sa8709、Sa8771和Sa8763的PFGE帶型不同，聚類分析顯示Sa8709和Sa8771相似度較高，為91.70%，與Sa8763相似度較低，為55.80%。經MLST分型后，Sa8709、Sa8771為ST11型，Sa8763為ST34型。
　　5.Sa8709擴增出符合預期長度的CTX-M基因片段，Sa8771擴增出符合預期長度的CTX-M基因片段和TEM基因片段，Sa8763

7、擴增出符合預期長度的OXA基因片段，測序結果經與對應的基因序列GenBank對比后相似性均在98%以上。
　　結論:
　　1.本地區(qū)臨床分離的非傷寒沙門菌呈現一定程度的多重耐藥性，未發(fā)現對碳青霉烯類耐藥。
　　2.本地區(qū)臨床分離的非傷寒沙門菌對氟喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星和左氧氟沙星的敏感性低于70%，應考慮重新評估氟喹諾酮類藥物是否仍適于非傷寒沙門菌感染的經驗治療和細菌感染性腹瀉的經驗治療。
　　3.本地區(qū)出現了攜帶