AcrAB外輸泵介導(dǎo)的雞沙門(mén)氏菌耐藥性研究.pdf

1、沙門(mén)氏菌是醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)臨床感染中最常見(jiàn)的病原菌之一。雞沙門(mén)氏菌是危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的重要病原菌之一。目前主要使用抗菌藥物對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防和治療。氟喹諾酮類(lèi)藥物為一類(lèi)化學(xué)合成的廣譜、高效、低毒的抗菌藥物。隨著該類(lèi)藥物的長(zhǎng)期和不當(dāng)使用，其耐藥性也隨之廣泛產(chǎn)生，且耐藥率逐年增高。耐藥性的產(chǎn)生導(dǎo)致預(yù)防和治療失敗，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。研究表明，雞沙門(mén)氏菌對(duì)各種抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性與主動(dòng)外輸系統(tǒng)(外輸泵)密切相關(guān)。其中AcrAB-TolC外輸

2、泵是最主要外輸泵，包括藥物質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)子AcrB、周質(zhì)融合蛋白AcrA和外膜通道蛋白TolC。acrA基因和acrB基因由一個(gè)操縱子調(diào)控，AcrAB在機(jī)能上是統(tǒng)一的，因此，其活動(dòng)性基本可以反映整個(gè)外輸泵的活動(dòng)性。 本試驗(yàn)采用試管二倍稀釋法通過(guò)體外誘導(dǎo)試驗(yàn)，獲得對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物環(huán)丙沙星不同水平的5株雞沙門(mén)氏菌耐藥菌株(分別為16×MIC、32×MIC、64×MIC、128×MIC、256×MIC，MIC為0.5μg-mL-1)。采用K

3、irby-Bauer紙片法測(cè)定上述耐藥菌株對(duì)10種抗菌藥物的敏感性，試驗(yàn)結(jié)果表明，5株耐藥菌株均為多重耐藥菌株，對(duì)氟喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素、復(fù)方磺胺的耐藥率均為100％；128×MIC、256×MIC耐藥菌株對(duì)氨芐西林和頭孢唑啉也表現(xiàn)為耐藥；但誘導(dǎo)的耐藥菌株對(duì)卡那霉素，慶大霉素等仍敏感。從以上結(jié)果可見(jiàn)，雞沙門(mén)氏菌對(duì)多數(shù)抗菌藥物的耐藥率都較高；且氟喹諾酮類(lèi)藥物存在交叉耐藥現(xiàn)象。以氰氯苯腙(CCCP)作為能量抑制劑，使菌株處在低能狀態(tài)，用紫外分光

4、光度法檢測(cè)它們?cè)谀芰空＜耙种茽顟B(tài)下對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物環(huán)丙沙星攝取的速率。結(jié)果顯示，當(dāng)無(wú)CCCP時(shí)，耐藥菌株菌體內(nèi)環(huán)丙沙星濃度低于敏感株；而當(dāng)有CCCP存在時(shí)，菌體內(nèi)環(huán)丙沙星濃度隨攝取時(shí)間而遞增，與無(wú)CCCP存在時(shí)相比，保持明顯高的穩(wěn)態(tài)濃度；而質(zhì)控菌株C79-13，由于外輸泵的作用不占主導(dǎo)，所以，不論有無(wú)CCCP存在，菌體內(nèi)環(huán)丙沙星濃度隨攝取時(shí)間而遞增，且保持較耐藥菌株明顯高的穩(wěn)態(tài)濃度。初步證明耐藥菌株存在外輸泵機(jī)制。Girud等人研究表

5、明，沙門(mén)氏菌存在由AcrAB外輸泵介導(dǎo)的耐藥機(jī)制，外輸泵的活動(dòng)性與耐藥性水平有一定的相關(guān)性。本試驗(yàn)16×MIC、64×MIC、128×MIC耐藥菌株進(jìn)行acrA基因的克隆及序列分析，發(fā)現(xiàn)與質(zhì)控菌株相比，16×MIC耐藥菌株有一處發(fā)生氨基酸殘基取代，即M-40→T(Met→Thr)；64×MIC耐藥菌株有一處發(fā)生氨基酸殘基取代，即R-131→C(Arg→Cys)；128×MIC耐藥菌株沒(méi)發(fā)生取代。研究提示了雞沙門(mén)氏菌acrA基因突變并不是