雞a干擾素成熟蛋白基因的表達.pdf

1、干擾素(簡稱IFN)是一種具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、抑制細胞分裂和促進細胞凋亡等多種生物學(xué)活性的細胞因子。信號肽是指在新合成的多肽鏈中指導(dǎo)蛋白質(zhì)跨膜運輸?shù)陌被釟埢?，其長度絕大多數(shù)是20～30個氨基酸殘基，以含疏水氨基酸為主，位于“N”端。信號肽對蛋白質(zhì)的定位有著非常重要的作用，尤其是適當改造信號肽結(jié)構(gòu)可以提高外源蛋白的分泌效率。多數(shù)外源基因在大腸桿菌宿主中過量表達時，常常導(dǎo)致表達產(chǎn)物在胞內(nèi)形成不溶性的聚集體，即形成包涵體。包涵體表達具有表

2、達量大的優(yōu)點，但其中的重組蛋白缺乏生物學(xué)活性，需要進行變性和復(fù)性才能恢復(fù)其活性。因此，改造包涵體重組表達質(zhì)粒，向其中加一段L-天(門)冬酰胺酶Ⅱ(ASP)信號肽，用以提高外源蛋白的分泌效率，這種方法對真核分泌蛋白尤為有效。
　　 本研究設(shè)計一對特異性引物，從雞肝臟中擴增出編碼α干擾素的成熟蛋白基因(ChIFN-α)；將擴增得到的雞α干擾素的成熟蛋白基因與原核表達載體pET-28a(+)融合，構(gòu)建成原核重組表達質(zhì)粒pET-28a/

3、ChIFN-α，并對其誘導(dǎo)表達，考察編碼雞α干擾素的成熟蛋白基因的表達效果；在此工作的基礎(chǔ)上，通過設(shè)計一對特異性引物，從大腸桿菌中擴增出編碼ASP信號肽的基因片段，將ASP信號肽基因插入到pET-28a/ChIFN-α質(zhì)粒中構(gòu)建成分泌型原核重組表達質(zhì)粒pET-28a/ChIFN-α-ASP，并對其進行誘導(dǎo)表達，考察ASP信號肽在重組表達質(zhì)粒中的分泌表達作用和編碼雞α干擾素的成熟蛋白基因的表達效果。
　　 研究結(jié)果表明，已構(gòu)建的兩