ErbB4受體對(duì)人膽管細(xì)胞癌QBC939細(xì)胞系增殖與轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 ErbB4在人類膽管癌QBC939細(xì)胞系中的表達(dá)
　　目的:研究ErbB4受體在人膽管癌QBC939細(xì)胞系細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　方法:體外培養(yǎng)人膽管癌QBC939細(xì)胞系細(xì)胞，免疫熒光法檢測(cè)ErbB4在膽管癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:膽管癌QBC939細(xì)胞系中表達(dá)ErbB4蛋白。
　　結(jié)論:人膽管癌QBC939細(xì)胞中表達(dá)人類第4表皮生長(zhǎng)因子受體(ErBb4

2、)。證明本課題組選用QBC939細(xì)胞系來進(jìn)行后續(xù)體外實(shí)驗(yàn)的可行性。
　　第二部分 阻斷ErbB4受體對(duì)膽管癌QBC939細(xì)胞系細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲的影響
　　目的:考察經(jīng)AG1478特異性抑制劑阻斷ErbB4受體對(duì)人膽管癌QBC939細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響。
　　方法:分別加入終濃度為0μmol/L，1μmol/L，5μmol/L，10μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L，10

3、0μmol/L的AG1478阻斷膽管癌細(xì)胞ErbB4受體，使用CCK-8法測(cè)量各組膽管癌細(xì)胞增殖情況，并利用SPSS軟件計(jì)算AG1478對(duì)人膽管癌QBC939細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50值)。分別使用0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L AG1478阻斷膽管癌細(xì)胞ErbB4受體，使用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組膽管癌細(xì)胞遷移能力的變化。分別使用0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L濃度A

4、G1478阻斷膽管癌細(xì)胞ErbB4受體，使用Transwell小室法實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組膽管癌細(xì)胞侵襲能力的變化。
　　結(jié)果: AG1478以濃度依賴方式抑制QBC939細(xì)胞增殖，計(jì)算其IC50值為:49.14μmol/L。AG1478抑制ErbB4受體后，膽管癌QBC939細(xì)胞的遷移、侵襲能力減弱。
　　結(jié)論:ErbB4抑制劑能在體外抑制人類膽管癌QBC939細(xì)胞增殖、遷移與侵襲。
　　第三部分 抑制ErbB4受體能下調(diào)iN

5、OS表達(dá)
　　目的:研究ErbB4受體實(shí)現(xiàn)其腫瘤生物學(xué)功能可能的涉及的分子機(jī)制。
　　方法:使用50μmol/L濃度阻斷ErbB4受體，使用免疫蛋白印跡法測(cè)量阻斷前后細(xì)胞裂解液中iNOS含量，比較阻斷膽管癌細(xì)胞ErbB4受體能否抑制iNOS表達(dá)。分別使用濃度0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L的AG1478阻斷膽管癌細(xì)胞ErbB4受體，使用總一氧化氮檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量變化。分別

6、使用濃度0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，75μmol/L的AG1478阻斷膽管癌細(xì)胞ErbB4受體，使用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF含量變化。
　　結(jié)果:AG1478抑制ErbB4受體后，膽管癌QBC939細(xì)胞裂解液中iNOS含量減少。AG1478抑制ErbB4受體后，膽管癌QBC939細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO、VEGF含量減少，間接反映iNOS表達(dá)減少。
　　結(jié)論:ErbB4抑制劑能在體外抑制人類膽