尼美舒利增強(qiáng)光動(dòng)力療法對人膽管癌細(xì)胞株QBC939體外殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、膽管癌是膽道常見的惡性腫瘤，由于臨床癥狀出現(xiàn)晚、早期診斷困難，其外科根治性切除率很低，加上膽管癌對放療和化療均不敏感，因而預(yù)后較差。近年來，膽管癌的發(fā)病率和死亡率逐年上升，尋求新的有效的治療方法，對于提高膽管癌的臨床治療具有十分重要的意義。
　　 光動(dòng)力療法（photodynamic therapy，PDT）是一種侵入性較小的腫瘤治療方法，它利用腫瘤組織能夠聚集光敏物質(zhì)，在特定波長激光照射下，通過光化學(xué)反應(yīng)，在局部產(chǎn)生有細(xì)胞毒性

2、的活性氧物質(zhì)（reactive oxygen species，ROSs），從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。前期研究已發(fā)現(xiàn)PDT對人膽管癌細(xì)胞具有殺傷作用，但腫瘤仍有復(fù)發(fā)現(xiàn)象，因此，應(yīng)進(jìn)一步探索PDT治療腫瘤的機(jī)制、尋找提高PDT療效的新方法。
　　 環(huán)氧合酶（cyclooxygenase，COX）是花生四烯酸（arachidonic acid，AA）轉(zhuǎn)化為前列腺素（prostaglandins，PGs）過程中的限速酶，有兩種亞型，即COX-1

3、和COX-2，兩者具有不同的生物學(xué)功能。COX-1穩(wěn)定表達(dá)于多種組織，而COX-2是一種誘導(dǎo)型酶，生理狀況下在多數(shù)組織中不表達(dá)，但可被廣泛的血管內(nèi)外激活物如腫瘤壞死因子（TNF）、表皮生長因子（EGF）和白介素-1（IL-1）等迅速誘導(dǎo)表達(dá)。近年的研究發(fā)現(xiàn)，COX-2在結(jié)腸癌、肝癌、膽管癌等多種腫瘤中高表達(dá)，并與其發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，選擇性COX-2抑制劑對腫瘤細(xì)胞的生長和增殖具有抑制作用。
　　 已有的研究還發(fā)現(xiàn)，PDT可以刺

4、激前列腺素E2（prostaglandin E2）的釋放，PDT作用后環(huán)氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）持續(xù)高表達(dá)，而這些現(xiàn)象可能被COX-2抑制劑阻斷，因此，COX-2抑制劑有可能提高PDT的治療效果。本實(shí)驗(yàn)通過以血卟啉衍生物（hematoporphrphyrin derivative，HpD）為光敏劑介導(dǎo)的PDT聯(lián)合選擇性COX-2抑制劑尼美舒利作用于體外培養(yǎng)的人膽管癌細(xì)胞株QBC939，研究HpD-PDT

5、聯(lián)合尼美舒利對人膽管癌細(xì)胞的殺傷作用及其可能的作用機(jī)制，為膽管癌的防治探索新方法。
　　 目的：觀察COX-2抑制劑尼美舒利增強(qiáng)HpD-PDT對人膽管癌細(xì)胞株QBC939的體外殺傷效果，研究HpD-PDT及其聯(lián)合尼美舒利對人膽管癌細(xì)胞caspase-3活化的影響，探索HpD-PDT及其聯(lián)合尼美舒利殺傷人膽管癌細(xì)胞可能的作用機(jī)制。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對照組、單純HpD-PDT組、單純尼美舒利組和聯(lián)合組（先行HpD-PD

6、T處理，后加用尼美舒利）。對體外培養(yǎng)的人膽管癌細(xì)胞株QBC939進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用MTT法檢測其光密度值（OD570值），觀察不同實(shí)驗(yàn)條件下HpD-PDT聯(lián)合尼美舒利對人膽管癌細(xì)胞的體外殺傷作用，分析殺傷效應(yīng)與HpD濃度和尼美舒利濃度的關(guān)系并繪制其生長曲線，光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；分光光度法檢測HpD-PDT及其聯(lián)合尼美舒利（nimesulide）對膽管癌細(xì)胞caspase-3活性的影響。
　　 結(jié)果：（1）MTT法顯示HpD-

7、PDT、尼美舒利、HpD-PDT聯(lián)合尼美舒利都能抑制體外培養(yǎng)的QBC939細(xì)胞增殖，其效應(yīng)隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長而增強(qiáng)；（2）與單純應(yīng)用HpD-PDT或尼美舒利相比，二者聯(lián)合作用QBC939細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象更明顯；（3）在達(dá)到對QBC939細(xì)胞同樣抑制率的條件下，聯(lián)合應(yīng)用可以同時(shí)減少HpD和尼美舒利的使用量；（4）分光光度法顯示，HpD-PDT作用QBC939細(xì)胞后能早期激活caspase-3，效應(yīng)呈劑量依賴性，與時(shí)間負(fù)

8、相關(guān)；（5）與單純應(yīng)用HpD-PDT或尼美舒利相比，二者聯(lián)合作用QBC939細(xì)胞后，caspase-3的活性升高更明顯，活化時(shí)間更長。
　　 結(jié)論：（1）HpD-PDT能早期激活caspase-3，其效應(yīng)呈劑量依賴性，表明caspase-3的激活可能是HpD-PDT殺傷人膽管癌細(xì)胞的機(jī)制之一；該效應(yīng)與時(shí)間負(fù)相關(guān)，亦可解釋HpD-PDT對人膽管癌細(xì)胞殺傷效應(yīng)的有限性和不持久性。（2）HpD-PDT與尼美舒利聯(lián)用時(shí)，細(xì)胞殺傷效應(yīng)更明