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文檔簡介
1、動物膽汁藥用在中國已有3000多年的歷史,歷代本草書籍中收錄記載的膽汁藥用動物有30多種。動物膽汁中的藥性成分主要是膽汁酸,已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥等領(lǐng)域。尤其是熊膽汁中的熊去氧膽酸(UDCA)和?;切苋パ跄懰?TUDCA),能有效溶解膽結(jié)石,且為熊膽汁的主要藥用成分。最近一些年來,由于活熊取膽有悖于動物福利理念,養(yǎng)熊業(yè)正遭到公眾的抵制,但人們對熊膽的需求并無縮減。因此,尋找熊膽藥品的替代品已成為學(xué)術(shù)界和中國社會的迫切需要。
動物膽
2、汁酸的研究雖然已經(jīng)很深入,但人們始終沒有找到含有UDCA或TUDCA的理想對象。牛膽、豬膽、羊膽、雞膽、蛇膽、魚膽等雖然也有類似物質(zhì),但均與熊膽成分藥性有一定差距,而無法成為替代。究其原因,可能是這些動物的食性、分類或生理特征都與熊類的相差甚遠(yuǎn)。熊類雖然是雜食動物,但仍然偏向于動物性食物,其膽汁物質(zhì)的生成與作用必然有別于純草食性動物(如:豬、牛、羊)的膽汁物質(zhì)。
藍(lán)狐(Alopex lagopus)是北極狐在人工圈養(yǎng)下的經(jīng)濟(jì)野
3、生動物,食性以動物性飼料(如:魚類)為主,也喂食少量谷物,與養(yǎng)殖熊的飼料相似。人類養(yǎng)殖藍(lán)狐已有100多年的歷史,但利用目標(biāo)主要是其毛皮。中國目前每年生產(chǎn)藍(lán)狐皮約1000萬張,取皮后的尸體和內(nèi)臟多被廢棄,意味著每年要浪費1000多萬個膽囊。藍(lán)狐膽汁中含有什么物質(zhì)?是否具有類似熊膽汁成分的高藥性物質(zhì)?至今仍無人開展詳細(xì)的研究與分析。在這樣的大背景下,探索藍(lán)狐的膽汁藥性不僅具有很強(qiáng)的理論意義,而且具有極大的生產(chǎn)實踐和社會意義,能為尋找熊膽替代
4、品提供新的思路與途徑,這也是本研究的主要原因。
動物膽汁酸有許多類別,而本文主要研究的成分有兩種:一是游離型的UDCA,另一是結(jié)合型的TUDCA。這兩種物質(zhì)都是熊膽汁中的有效藥用成分,對于治療肝損傷具有明顯的療效,也是人們追逐熊膽的目地。為了尋找這兩類物質(zhì),本文同時使用了兩種有效的方法,即:薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)。前者能定性鑒別UDCA,后者可定量TUDCA。為了探研藍(lán)狐膽汁物質(zhì)的藥用價值,本文采用了
5、三種肝損傷模型,即:四氯化碳(CCL4)肝損傷模型、D-半乳糖鹽酸鹽(D-Galn)肝損傷模型及酒精肝損傷模型。最后通過二甲苯抗炎模型及抗菌實驗,證明藍(lán)狐膽汁具有的抗炎、抑菌能力。
通過上述研究設(shè)計,本論文主要獲得了以下研究結(jié)果:
1.運用直觀和顯微鑒定方法,對30只飼養(yǎng)藍(lán)狐的新鮮膽、干燥膽及膽汁粉的物理特征進(jìn)行了觀察和描述。發(fā)現(xiàn),新鮮的藍(lán)狐膽每個平均重約平均重為3.70±0.25g;每個膽囊平均含膽汁2.15±0.
6、35g。晾干后的膽囊平均重1.50±0.20g;干燥后的膽汁粉為黃棕色,有光澤,易碎,每個膽囊平均含干膽汁粉約0.82±0.30g。膽粉結(jié)晶為不規(guī)則形,無偏光,有紋理,與熊膽粉鏡下結(jié)構(gòu)相似。
2.采用TLC法,對藍(lán)狐膽汁粉中的成分進(jìn)行了定性分析。發(fā)現(xiàn),藍(lán)狐膽汁中存在三類物質(zhì),其中兩類與熊膽汁中的相同,并可鑒定出其中一類為UDCA。熊膽汁中也存在三類物質(zhì)。藍(lán)狐膽汁成分與熊膽汁成分的相似度為50%。
3.利用HPLC法,
7、對藍(lán)狐膽汁粉中的成分進(jìn)行了定性與定量分析。發(fā)現(xiàn),藍(lán)狐膽汁與熊膽汁有10類共同物質(zhì),其中一類可鑒定為TUDCA。此外,藍(lán)狐膽汁共有13類物質(zhì),熊膽汁共有約20類物質(zhì)。進(jìn)一步,經(jīng)計算得到每250.00mg藍(lán)狐膽汁的干燥粉末中含有33.41mg的?;切苋パ跄懰徕c,而每250.00mg引流熊膽的干燥粉末中含有?;切苋パ跄懰徕c59.88mg,運用UPLC-Q-TOF/MS(高分辨飛行時間質(zhì)譜法)同樣檢測到UDCA及TUDCA。
4.借鑒
8、經(jīng)典的CCL4、 D-Galn及酒精性肝損傷造模方法,各對五組(其中一組為非損傷的空白組)小鼠進(jìn)行了肝損傷實驗。發(fā)現(xiàn),四組被CCL4或D-Galn或酒精損傷了肝以后的小鼠,血液中AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)、ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、T-CHO(總膽固醇)、以及肝組織MDA(丙二醛)濃度都明顯增高,模型組與空白組差異明顯(P<0.05)。
5.三個模型實驗均發(fā)現(xiàn),無論是高、低劑量,投喂藍(lán)狐膽汁粉的小鼠AST、ALT、T-CHO、MDA四個
9、指標(biāo)均出現(xiàn)了明顯下降(P<0.05),說明藍(lán)狐膽汁有效降低了這四個指標(biāo)的濃度。這三個組與空白組對比時,CCL4肝損傷模型實驗中MDA含量無顯著差異,D-Galn肝損傷模型實驗中高劑量組的MDA含量無顯著差異,說明藍(lán)狐膽至少能使這種物質(zhì)恢復(fù)正常。
6.三個藥物組(護(hù)肝片、高、低劑量藍(lán)狐膽汁)之間的指標(biāo)絕對數(shù)值存在差異,反映其療效差別為:陽性組>高劑量組>低劑量組。組織切片之間的形態(tài)差異揭示了小鼠肝損傷后的組織病變,也證明了三個藥
10、物組之間的療效差別。不過,在D-Galn肝損傷模型實驗中,使MDA恢復(fù)正常時,高劑量的藍(lán)狐膽汁似乎比護(hù)肝片更有療效。
7.二甲苯經(jīng)典抗炎模型揭示,尤以藍(lán)狐膽汁高劑量組有較好的抗炎效果。
8.鋼管體外抑菌實驗方法,發(fā)現(xiàn):三個不同劑量藍(lán)狐膽汁,對金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、變形桿菌(Proteus sp.)、枯草芽孢桿菌(Bacillus su
11、btilis)均有明顯的抑制作用,并隨使用劑量的加大,抑菌效果隨之增強(qiáng)。藍(lán)狐膽汁對大腸桿菌的抑制作用最強(qiáng),其次是金黃色葡萄球菌,再次是變形桿菌。對比之下,對枯草芽孢桿菌的抑制效果較差。
本文的創(chuàng)新性點:使用TLC和HPLC法對藍(lán)狐膽汁進(jìn)行分析,為進(jìn)一步研究提供了方法參考;發(fā)現(xiàn)藍(lán)狐膽汁中存在UDCA和TUDCA,為熊膽汁藥品替代提供了新的思路;對藍(lán)狐膽汁酸的藥性進(jìn)行分析,證明了藍(lán)狐膽汁護(hù)肝、抗炎抑菌作用,為空白的藍(lán)狐膽開發(fā)提供研
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