柴樸湯對(duì)肝郁型哮喘miR-21、PTEN的表達(dá)及嗜酸性粒細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、研究目的：通過(guò)研究柴樸湯對(duì)肝郁型哮喘大鼠miR-21、PTEN表達(dá)及嗜酸性粒細(xì)胞凋亡的影響，從而探討柴樸湯防治肝郁型哮喘的機(jī)制與miR-21、PTEN及嗜酸性粒細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。
　　研究方法：1）70只雄性SD大鼠隨機(jī)原則分為肝郁組(n=30）與非肝郁組（n=40），肝郁組大鼠于第1~28天進(jìn)行慢性不可預(yù)見性應(yīng)激刺激，非肝郁組不做任何處理。造模結(jié)束后檢測(cè)肝郁組與非肝郁組大鼠體重變化、糖水消耗量、血液腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）含

2、量，評(píng)價(jià)肝郁型模型。造模成功后將肝郁組與非肝郁組每10只分為一組一共7組，非肝郁組分為對(duì)照組、正常中藥組、哮喘組、哮喘治療組，肝郁組分為肝郁哮喘組、肝郁哮喘治療組、地塞米松組。哮喘組、哮喘治療組、肝郁哮喘組、肝郁哮喘治療組、地塞米松組5組采用用卵蛋白（OVA）誘導(dǎo)復(fù)制哮喘模型。自霧化致敏大鼠造模開始，每次霧化吸入致敏劑前30 min，各組大鼠均予以胃內(nèi)注藥處理。正常中藥組、哮喘治療組、柴樸湯組予以柴樸湯顆粒（每克顆粒含生藥18.5g）3

3、50 mg/kg灌胃；地塞米松組大鼠予以地塞米松1 mg/kg灌胃；正常對(duì)照組、哮喘模型組、肝郁哮喘組3組大鼠予以等量生理鹽水處理。干預(yù)結(jié)束后，根據(jù)各組大鼠的癥狀及體征進(jìn)行評(píng)分；肺功能測(cè)定，小動(dòng)物呼吸機(jī)測(cè)定各組大鼠在不同濃度乙酰膽堿激發(fā)下測(cè)定的氣道阻力；蘇木素-伊紅染色觀察各組大鼠氣道及肺組織病理改變；涂片法測(cè)定各組大鼠支氣管肺泡灌洗液中白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，嗜酸性粒細(xì)胞比例；用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定支氣管灌洗液 EOS凋亡率；熒光實(shí)時(shí)定量

4、PCR檢測(cè)血液及肺組織miR-21水平表達(dá)；蛋白質(zhì)免疫印跡（Western-blot）和RT-PCR檢測(cè)肺組織表達(dá)PTEN及PTEN mRNA水平。
　　結(jié)果：1、肝郁模型的鑒定：1）體重比較：肝郁組體重286.69±7.36（g)造模結(jié)束后較對(duì)照組233.46±8.52（g)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；2)肝郁組糖水消耗量8.41±0.79（ml)造模結(jié)束后較對(duì)照組19.42±0.86（ml)明顯降低，差異具有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);3)正常對(duì)照組血漿ACTH含量709±263（ng/L)造模結(jié)束后較肝郁組1768±256（ng/L)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);
　　2、各組大鼠癥狀評(píng)分及肺功能結(jié)果：哮喘組和肝郁哮喘組大鼠支氣管癥狀評(píng)分及肺功能測(cè)定氣道阻力高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮喘高于哮喘組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組低于哮喘組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮

6、喘治療組、地塞米松組均低于肝郁哮喘組，,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組、肝哮治療組及地塞米松組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞分類計(jì)數(shù)白細(xì)胞細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)、及嗜酸性粒細(xì)胞百分比哮喘組與肝郁哮喘組均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；其中肝郁哮喘組高于哮喘組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組低于哮喘組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮喘治療

7、組、地塞米松組均低于肝郁哮喘組，,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組、肝哮治療組及地塞米松組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05)。支氣管肺組織HE染色可見：正常對(duì)照組、正常中藥組支氣管肺組織結(jié)構(gòu)正常完整，未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管壁厚度正常；哮喘組：大量粘液栓，鏡下黏膜上皮局部脫落，基底層膜增厚及玻璃樣變，粘膜下水腫，粘液腺增生。杯狀細(xì)胞增多，平滑肌增生肥大，可見平滑肌破壞斷裂，在管壁及粘液栓中可見嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)

8、胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)。相對(duì)于哮喘組肝郁哮喘炎癥反應(yīng)及氣道重塑更為嚴(yán)重；余各組支氣管肺組織病理改變明顯輕于哮喘模型組及肝郁哮喘組。
　　3、各組大鼠肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞凋亡率哮喘組（4.20±0.41）及肝郁哮喘組（4.29±0.28）嗜酸性粒細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組（5.82±0.48）明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘組（4.20±0.41）與肝郁哮喘組（4.29±0.28）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。哮喘治療組（1

9、5.74±0.34）嗜酸性粒細(xì)胞凋亡率高于哮喘組（4.20±0.41），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），肝哮治療組（15.77±0.42）及地塞米松組（15.43±0.55）嗜酸性性粒細(xì)胞凋亡率明顯高于肝哮治療組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），哮喘治療組、肝哮治療組及地塞米松組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。4、各組大鼠血液及肺組織中miR-21的相對(duì)表達(dá)量哮喘組、肝郁型哮喘組血液和肺組織miR-21的相對(duì)表達(dá)量明顯高于

10、對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；肝郁哮喘組血液和肺組織miR-21相對(duì)表達(dá)量高于哮喘組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組血液和肺組織 miR-21相對(duì)表達(dá)量低于哮喘組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；肝哮治療組及地塞米松組均低于肝郁哮喘組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘治療組、肝哮治療組、地塞米松組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　5、各組大鼠肺組織PTENmRNA、PTEN蛋白的相對(duì)

11、表達(dá)量哮喘組及肝郁哮喘組肺組織PTENmRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；哮喘組表達(dá)高于肝郁型哮喘組，哮喘治療組表達(dá)高于哮喘組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肝哮治療組及地塞米松高于肝郁哮喘組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；哮喘治療組、肝哮治療組、地塞米松組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：1、肝郁型哮喘大鼠血液miR-21表達(dá)增加，且與哮喘的癥狀、炎癥反應(yīng)程度呈正相關(guān)，