脂多糖對大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞PTEN表達及細胞凋亡的影響.pdf

1、研究目的:支氣管肺發(fā)育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BPD)是一種常見于早產(chǎn)兒的慢性肺損傷疾病,炎癥是造成肺損傷的主要因素之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)BPD的發(fā)生發(fā)展可能與肺泡上皮細胞過度凋亡相關(guān)。PTEN(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten)可以通過調(diào)控PI3K/AKT,MAPK等多種細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路,誘導細胞周期阻滯及凋亡,抑制

2、細胞生長,其表達變化與細胞凋亡密切相關(guān)。本實驗擬探討脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)對大鼠肺泡II型上皮細胞(alveolar epithelial cell Ⅱ,AECII)PTEN表達及細胞凋亡的影響。
　　研究方法:采用胰酶及膠原酶消化法,消化孕19d的SD大鼠胎肺組織后,經(jīng)差數(shù)離心及反復貼壁法,分離純化大鼠肺泡II型上皮細胞并進行原代培養(yǎng),經(jīng)AKP染色及SP-C免疫熒光鑒定細胞純度后,隨機分為對照組和

3、LPS(100ug/ml)干預組,Western blotting檢測不同時間點(0、6、12、24、48h)Caspase-3、PTEN蛋白表達。
　　研究結(jié)果:Caspase-3的表達在對照組中于24h達高峰,LPS組中隨著干預時間延長而逐漸升高,同樣于24h達高峰并于48h表達降低,與對照組相比,12h,24h蛋白表達明顯增加(p<0.05),并且在24h可檢測到Caspase-3活化片段,6h,48h Caspase-3表

4、達無差異;PTEN在對照組各時相呈較穩(wěn)定表達,在LPS組12h蛋白表達高于6h,于24h出現(xiàn)表達降低,與24h相比,48h蛋白表達明顯降低(p<0.05),與對照組相比6h,12hPTEN表達顯著增高(p<0.05);
　　結(jié)論:LPS誘導的AECII凋亡為Caspase-3依賴途徑;凋亡與LPS干預存在時相關(guān)系;LPS對AECII PTEN表達有一定影響,但PTEN的表達可能與其誘導的AECII Caspase-3表達增高及凋亡