柴樸湯上調(diào)MAL對(duì)氣道上皮細(xì)胞分泌IL-5、FasL的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討柴樸湯上調(diào)MAL對(duì)氣道上皮細(xì)胞分泌IL-5、FasL的影響及作用機(jī)制
　　方法：32只健康雄性SD大鼠，體重(250±10)g，隨機(jī)分為2組，每組各16只。其中一組再隨機(jī)分為兩組，每組8只，即柴樸湯組、正常組，提取柴樸湯含藥血清和正常血清。另一組為哮喘組，以VOA致敏，復(fù)制哮喘模型，取哮喘血清。同時(shí)取哮喘組及正常組肺組織行HE染色，觀察其炎性浸潤(rùn)情況。將生長(zhǎng)良好的大鼠氣道上皮細(xì)胞分組：正常組（A組），哮喘組（B組），預(yù)柴

2、樸湯組（C組），U0126組（D組）和柴樸湯組（E組）；正常組予以加3mL正常血清，哮喘組予以加2mL哮喘血清和1mL正常血清，預(yù)柴樸湯組予以提前2小時(shí)加1mL柴樸湯含藥血清后再加2mL哮喘血清，U0126組予以加10μL U0126和2mL哮喘血清和1mL正常血清，柴樸湯組予以加1mL柴樸湯含藥血清和2mL哮喘血清，培養(yǎng)24小時(shí)后，提取細(xì)胞蛋白、RNA,收集培養(yǎng)液。用半定量RT-PCR檢測(cè)氣道上皮細(xì)胞中MAL、IL-5、FasL mR

3、NA的表達(dá)。用Western blot檢測(cè)MAL、FasL、P-ERK1/2蛋白在氣道上皮細(xì)胞中的表達(dá)。以ELISA檢測(cè)上清液中IL-5濃度。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠的一般情況及HE染色的結(jié)果
　　1)一般情況
　　用卵蛋白致敏激發(fā)后，大鼠精神萎靡，毛發(fā)枯黃，煩躁，易激惹，呼吸困難、深促，腹肌收縮、行動(dòng)緩慢呆滯等；柴樸湯組及正常組大鼠未出現(xiàn)上訴情況。
　　2) HE染色
　　?正常組大鼠：肺泡完整，

4、肺泡間質(zhì)較清晰，氣道壁及平滑肌無(wú)增厚，氣道周圍無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　?哮喘組大鼠：大部分肺泡破壞、融合，肺泡間隔斷裂，氣道壁及平滑肌明顯增厚，管腔狹窄，周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　2、檢測(cè)FasL、MAL、P-ERK1/2、IL-5蛋白表達(dá)結(jié)果
　　MAL、FasL蛋白在哮喘組表達(dá)最弱，與柴樸湯組、正常組比較差異有顯著性（p<0.05）；MAL蛋白在正常組表達(dá)最強(qiáng)；IL-5蛋白在哮喘組的表達(dá)上調(diào)，與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義（p<0.05）；U0126組、柴樸湯組的FasL蛋白的表達(dá)高于哮喘組，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性（p<0.05）；P-ERK1/2蛋白在U0126組表達(dá)下調(diào)，哮喘組上調(diào)，兩組比較差異有顯著性（p<0.05）；柴樸湯組P-ERK1/2蛋白的表達(dá)較弱，與哮喘組比較差異有意義（p<0.05），但仍高于正常組，兩組相比差異有意義性（p<0.05），柴樸湯組P-ERK1/2蛋白的表達(dá)高于U0126組，差異有顯著性（p<0.05）；U0126組MAL蛋

6、白的表達(dá)稍低于柴樸湯組，比較差異無(wú)顯著意義（p>0.05）；柴樸湯組與預(yù)柴樸湯組MAL蛋白的表達(dá)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　3、細(xì)胞上清液IL-5的濃度結(jié)果
　　IL-5濃度在哮喘組表達(dá)最高，與柴樸湯組及UO126組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；柴樸湯組 IL-5濃度高于正常組，兩者比較差異有顯著性（p<0.05），但其濃度低于U0126組，比較差異有意義（p<0.05）；而與預(yù)柴樸湯組比較差異不顯著（

7、p>0.05）。
　　4、檢測(cè)FasL、MAL、IL-5mRNA的表達(dá)
　　FasL、MALmRNA在哮喘組表達(dá)最弱，與柴樸湯組、UO126組及正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；柴樸湯組 MALmRNA的表達(dá)與預(yù)柴樸湯組、UO126組相比差異無(wú)顯著性（p>0.05）；柴樸湯組FasLmRNA的表達(dá)比U0126組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。IL-5mRNA的表達(dá)UO126組較柴樸湯組高，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義