P120ctn在沖擊流場引發(fā)血管內(nèi)皮損傷中的作用.pdf

1、目的：顱內(nèi)動脈瘤的形成機(jī)制目前仍不清楚。我們前期研究發(fā)現(xiàn)表明血流動力學(xué)改變所致的血管內(nèi)皮損傷所致的血管壁重構(gòu)是顱內(nèi)動脈瘤形成的主要病理生理環(huán)節(jié)，且在動脈瘤的形成過程中VE-cadherin與P120catenin(P120ctn)在血管內(nèi)膜的表達(dá)進(jìn)行性下降。本課題通過體外培養(yǎng)的細(xì)胞在沖擊流場作用下，檢測血流動力學(xué)因素對P120ctn及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探討血流動力學(xué)因素參與顱內(nèi)動脈瘤形成的可能。
　　方法：自行設(shè)計的T型流室系統(tǒng)

2、可模擬血管分叉處的血流環(huán)境，并通過提供不同流速的沖擊流體，在流室內(nèi)創(chuàng)造不同條件的血流動力學(xué)環(huán)境。體外培養(yǎng)人類臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）及運用SiRNA干擾技術(shù)敲除P120ctn基因片段后的HUVEC。將細(xì)胞種植在22×50mm的載玻片上，待細(xì)胞匯合度達(dá)到85-95％后將載玻片置入流室，在250ml/min和500ml/min的流速作用下，觀察3小時、6小時和12小時處理后，HUVEC細(xì)胞形態(tài)、生長方式，及P120ctn、VE-Ca

3、dherin、Kaiso、MMP-2、α-catenin和β-catenin的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：正常HUVEC在沖擊流作用12小時后仍可維持正常貼壁生長。加載250ml/min的流速，作用12小時后沖擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形，細(xì)胞分布未見明顯改變。加載流速500ml/min，6小時后沖擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形，細(xì)胞分布未見明顯改變。12小時后,可見沖擊點處的細(xì)胞過度融合，細(xì)胞間隙變窄。高切應(yīng)力（WSS）和高切應(yīng)

4、力梯度（WSSG）區(qū)的細(xì)胞密度下降且形態(tài)被拉長，部分細(xì)胞向下游遷徙，排列與沖擊流方向平行一致。兩種流速加載12小時后，P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso和α-catenin表達(dá)下降，β-catenin表達(dá)未見明顯變化，MMP-2表達(dá)升高；其中P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2的變化具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　P120ctn敲除后的HUVEC在流室內(nèi)生長時間短于正常HUVEC。加

5、載250ml/min的流速，1小時以內(nèi)沖擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形，但高WSS及高WSSG區(qū)域部分細(xì)胞開始向下游移動并聚集，細(xì)胞排列方式部分隨流體方向排列。加載500ml/min時，30分鐘以內(nèi)沖擊點及其周圍的細(xì)胞仍維持著多邊形，細(xì)胞分布未見明顯改變。1小時后，可見高切應(yīng)力（WSS）和高切應(yīng)力梯度（WSSG）區(qū)的細(xì)胞密度明顯下降且形態(tài)被拉長，大量細(xì)胞向下游遷徙并集聚，排列與沖擊流方向平行一致。加載兩種流速作用1小時后，VE-Cad

6、herin、Kaiso、α-catenin表達(dá)下降，β-catenin表達(dá)無明顯變化，MMP-2表達(dá)升高；其中VE-Cadherin、Kaiso以及MMP-2的表達(dá)改變具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。空病毒對照組在加載250ml/min和500ml/min后，細(xì)胞形態(tài)和生長方式與正常對照組相比未見明顯改變，P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso、α-catenin，β-catenin和MMP-2的表達(dá)也未見明顯改變(P>0.