血管周圍脂肪組織在尼古丁誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞損傷中的作用.pdf

1、吸煙嚴重威脅人類健康，可導(dǎo)致動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生，而動脈粥樣硬化性疾病又是導(dǎo)致全球死亡的主要危險因素。吸煙使動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生率和病死率增高2-6倍。尼古丁(Nicotine)作為煙草中的主要毒性堿成分，被認為是引起心血管損害的主要物質(zhì)。以往研究多集中在吸煙對血管內(nèi)皮的直接損傷進而引發(fā)動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生，而血管周圍脂肪組織在內(nèi)皮細胞損傷中所起到的作用尚未得到進一步研究。近年來，隨著對脂肪組織研究的深入，以及心血管疾病發(fā)病

2、率的急劇增加，血管周圍脂肪組織(Perivascular adipose tissue，PVAT)因與血管外膜間不存在任何解剖學(xué)屏障，逐漸成為學(xué)者們關(guān)注的重點。因此，本研究主要從尼古丁誘導(dǎo)的NF-κB通路和細胞凋亡水平，研究PVAT與血管內(nèi)皮細胞之間的相關(guān)性。通過體外細胞培養(yǎng)，分析尼古丁刺激條件下內(nèi)皮細胞、血管周圍脂肪細胞及內(nèi)皮-脂肪細胞共培養(yǎng)后，NF-κB通路相關(guān)蛋白的變化情況，以及各細胞的凋亡情況，確定尼古丁對血管內(nèi)皮細胞的促凋亡作

3、用和PVAT對其凋亡的調(diào)控作用及其作用機制。明確血管周圍脂肪組織在血管內(nèi)皮損傷中的作用，及其在動脈粥樣硬化性疾病中的作用。
　　用10-6mol·L-1，10-7mol·L-1和10-8mol·L-1濃度的尼古丁分別處理內(nèi)皮細胞和脂肪細胞，AnnexinⅤ-FITC檢測細胞凋亡。此外，本研究創(chuàng)新性的利用transwell培養(yǎng)板構(gòu)建內(nèi)皮細胞-脂肪細胞共培養(yǎng)體系，10-6mol·L-1的尼古丁處理內(nèi)皮-脂肪細胞共培養(yǎng)體系后，同樣的方法

4、檢測共培養(yǎng)細胞凋亡。同時用qRT-PCR和western blot的方法分別檢測IKKβ、NF-κB p65和IkBα的基因和蛋白表達情況，并通過免疫熒光的方法檢測NF-κB p65的核轉(zhuǎn)移變化。
　　本研究結(jié)果表明，尼古丁對內(nèi)皮細胞和脂肪細胞的促凋亡作用具有濃度依賴性，能夠作用于NF-κB信號通路來調(diào)節(jié)細胞凋亡。其中內(nèi)皮細胞中10-6mol·L-1處理組細胞凋亡較對照組明顯增加(P＜0.01)。相比之下脂肪細胞對尼古丁的反應(yīng)較為

5、敏感，不同作用濃度下其細胞凋亡較對照組均明顯增加(P＜0.05)。且無論是在基因還是蛋白水平，尼古丁處理后內(nèi)皮細胞和脂肪細胞中IKKβ和NF-κB p65的表達量較對照組增加(P＜0.01;P＜0.05)。而共培養(yǎng)后的兩種細胞其細胞凋亡數(shù)目均較單純培養(yǎng)組明顯增加(P＜0.01;P＜0.05)。但IKKβ、NF-κB p65和IkBα的表達量的變化情況以共培養(yǎng)內(nèi)皮細胞的變化為主。共培養(yǎng)內(nèi)皮細胞中IKKβ、NF-κB p65的表達較單獨培養(yǎng)

6、內(nèi)皮細胞明顯增加，IkBα明顯減少(P＜0.05)。同時，NF-κB p65的核轉(zhuǎn)移也較單獨培養(yǎng)內(nèi)皮細胞明顯增加。此外，NF-κB信號通路抑制劑PDTC處理內(nèi)皮細胞和脂肪細胞后細胞凋亡數(shù)目明顯減少(P＜0.05)。
　　一定濃度的尼古丁通過激活NF-κB信號通路，促進NF-κB的磷酸化，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞的過度凋亡和成熟脂肪細胞過度凋亡甚至壞死。且脂肪細胞經(jīng)尼古丁染毒后能夠進一步激活內(nèi)皮細胞中NF-κB信號通路，進而加重尼古丁對內(nèi)皮細胞