血管周圍脂肪在糖尿病大鼠血管內(nèi)皮損傷修復(fù)中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 3T3-L1前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的方法研究
　　目的：觀察誘導(dǎo)劑作用時(shí)間對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞系分化的影響。方法：參照傳統(tǒng)“雞尾酒”法，分別在作用時(shí)間為2（傳統(tǒng)法）、3、4天（后兩者稱改良法）條件下誘導(dǎo)分化。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，油紅O染色及甘油三酯檢測(cè)脂肪含量。結(jié)果：傳統(tǒng)法脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化率大于80％者占65％，而改良法轉(zhuǎn)化率大于80％者為100％(P＜0.05)。

2、4天組細(xì)胞脂肪含量高于2、3天組(1402.5±9.4 vs.1078.5±15.2或1083.4±9，6 ng/mL，P＜0.05)，而2與3天組間無明顯區(qū)別(1078.5±15.2 vs.1083.4±9.6 ng/mL，P＞0.05)。結(jié)論：改良法3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)法可提高脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，可作為高效制作脂肪細(xì)胞模型的方法之一。優(yōu)選地，推薦作用時(shí)間為3天的改良法誘導(dǎo)方案。
　　第二部分 3T3-L1脂肪細(xì)胞對(duì)高糖刺激下

3、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響
　　目的：高糖可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，脂肪細(xì)胞具有強(qiáng)大的內(nèi)分泌功能，參與多種病理生理過程，該研究的主要目的是觀察脂肪細(xì)胞對(duì)高糖刺激下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。方法：該實(shí)驗(yàn)以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)共分為3組:正常對(duì)照組(A)、高糖刺激組(B)、高糖刺激+3T3-L1脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)組(C)。以Tubilin作為內(nèi)參，采用Western blot和rt-PCR方法檢測(cè)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1

4、、OPN、eNOS表達(dá)。結(jié)果：B組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)顯著低于A組和C組(P＜0.05)，C組eNOS表達(dá)低于A組(P＜0.05)。相反，B組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、OPN表達(dá)明顯高于A組和C組(P＜0.05)，而A組和C組間ICAM-1、OPN表達(dá)無顯著差異(P＞0.05)。結(jié)論：高糖刺激可導(dǎo)致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，脂肪細(xì)胞可通過上調(diào)eNOS表達(dá)、下調(diào)ICAM-1、OPN表達(dá)從而減低高糖對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損害。

5、r>　　第三部分 血管周圍脂肪在糖尿病大鼠血管內(nèi)皮損傷修復(fù)中的作用及機(jī)制研究
　　目的：探索血管周圍脂肪組織在糖尿病大鼠血管內(nèi)皮損傷修復(fù)中的作用。方法：SD雄性大鼠為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)共分為3組:空白對(duì)照組（A組）、糖尿病+頸動(dòng)脈球囊損傷組（B組）、糖尿病+頸動(dòng)脈球囊損傷+血管周圍脂肪組織移植組（C組），采用Western Blot、rt-PCR及免疫組化技術(shù)檢測(cè)大鼠頸動(dòng)脈組織中ICAM-1、OPN、eNOS表達(dá)情況，同時(shí)行HE染色觀