黑曲霉降解雞血血紅蛋白制備小分子多肽的工藝研究.pdf

1、本文以一株高產(chǎn)酸性蛋白酶的黑曲霉作為發(fā)酵初始菌，探討了利用該菌發(fā)酵雞血血紅蛋白（Hb）制備小分子活性肽的工藝條件，主要研究?jī)?nèi)容包括利用響應(yīng)面法優(yōu)化超高壓提取雞血血紅蛋白Hb的工藝，優(yōu)化黑曲霉發(fā)酵雞血Hb工藝條件，表面活性劑對(duì)黑曲霉制備Hb多肽的影響，以及水解Hb制備多肽的酶解效果等四個(gè)方面。
　　為了優(yōu)化超高壓提取Hb的最佳工藝，通過單因素試驗(yàn)研究了料液比、處理時(shí)間、超高壓壓力、pH值和處理溫度對(duì)Hb得率的影響，以Hb的得率為指標(biāo)

2、，選取較佳的條件，應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化Hb的提取條件；并評(píng)價(jià)超高壓對(duì)Hb特性中乳化性和起泡性的作用。研究得到的最佳工藝參數(shù)為料液比1:2.5、提取時(shí)間5.4min、超高壓壓力135MPa，Hb得率為7.0g/100 mL。此外，經(jīng)超高壓處理，Hb的乳化性明顯提高，乳化穩(wěn)定性下降；起泡性和泡沫穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)。
　　為了優(yōu)化黑曲霉降解Hb的工藝，利用正交設(shè)計(jì)考察了發(fā)酵培養(yǎng)基中組成對(duì)黑曲霉發(fā)酵雞血Hb的影響。在優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，研究了接

3、種量、裝液量、溫度和發(fā)酵時(shí)間對(duì) Hb降解率的影響。優(yōu)化發(fā)酵工藝后，Hb的降解率從優(yōu)化前的26.8%提高了18%。
　　本文研究了食品級(jí)非離子表面活性劑對(duì)Hb多肽得率的影響，研究結(jié)果表明，發(fā)酵2d后添加6g/L的十二烷基葡萄糖苷，繼續(xù)發(fā)酵16 h可以提高Hb多肽的得率，其得率為0.64 mg·N/mL，多于未添加組的0.21 mg·N/mL；采用凝膠色譜法測(cè)量了添加組和未添加組Hb多肽分子量的分布，結(jié)果表明食品級(jí)表面活性劑添加組分子

4、量在450~2000u的多肽含量顯著大于未添加組。
　　為了與市售的蛋白酶比較酶解Hb能力以及測(cè)定酶解產(chǎn)物分子量大小，本文對(duì)發(fā)酵液中的蛋白酶進(jìn)行初步的分離純化，并研究其酶學(xué)性質(zhì)且在各自最佳的酶解條件下水解 Hb。研究結(jié)果表明，中性蛋白酶酶解 Hb的能力最強(qiáng)，其次是酸性蛋白酶，但是利用凝膠色譜法檢測(cè)酶解產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)，酶解能力最強(qiáng)的中性蛋白酶獲得目標(biāo)產(chǎn)物Hb多肽的量更少，反而酸性蛋白酶獲得Hb多肽最多，研究表明利用黑曲霉降解Hb可以獲得目