血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑與胰激肽原酶對腎間質(zhì)纖維化作用研究.pdf

1、目的：腎小管間質(zhì)纖維化是慢性腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎功能衰竭的共同途徑。多種腎臟疾病可有腎間質(zhì)炎性細(xì)胞的浸潤，肌成纖維細(xì)胞的聚集，促纖維化因子的分泌，細(xì)胞外基質(zhì)生成增多、降解減少而產(chǎn)生腎纖維化，導(dǎo)致腎功能嚴(yán)重受損。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin convertingenzyme inhibitors，ACEI)通過抑制血管局部的腎素．血管緊張素系統(tǒng)(rennin angiotensin system，RAS)，減少血管緊張

2、素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ，AngⅡ)合成，防止腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展，其對腎臟的保護(hù)作用已得到了人們的公認(rèn)。近年來還發(fā)現(xiàn)ACEI類貝那普利可使腎臟局部組織中緩激肽(bradykinin，BK)降解減少，局部濃度升高，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解。而胰激肽釋放酶(pancreatic kininogenase，PK)，是目前最重要且研究最為廣泛的組織型激肽釋放酶，具有強(qiáng)大的激肽釋放酶活性，其作用于激肽原后，釋放賴氨酸緩激肽即胰激肽原

3、和緩激肽，BK與其受體結(jié)合，使組織產(chǎn)生多種活性因子，抑制Ang Ⅰ轉(zhuǎn)換為AngⅡ，減少腎素的生長；而且，BK可拮抗AngⅡ發(fā)揮腎臟保護(hù)和抗纖維化效應(yīng)。目前，貝那普利聯(lián)合胰激肽原酶已用于高血壓、蛋白尿和糖尿病腎病的治療，但對腎間質(zhì)纖維化疾病是否有抑制作用相關(guān)報道很少。故本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用貝那普利聯(lián)合胰激肽原酶(Benazepril co-treatmentwith oancreatic kininogenase)對實(shí)驗(yàn)性腎間質(zhì)纖維化模型大鼠進(jìn)行干

4、預(yù)試驗(yàn)，觀察腎臟病理、免疫組織化學(xué)檢測AngⅡ、TGF-β<,1>、PDGF-B的表達(dá)情況，并與單用貝那普利對比，探討聯(lián)合用藥對腎間質(zhì)纖維化大鼠腎臟是否具有保護(hù)作用及其可能的機(jī)制，為臨床腎間質(zhì)纖維化的防治提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。 方法：選擇健康雄性SD大鼠60只，體重180 g～220 g為研究對象(由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)。隨機(jī)選取15只作為假手術(shù)組(A組，n=15只)，3％水合氯醛(0.1 ml/kg體重)腹腔麻醉，開腹

5、后，只游離輸尿管但不結(jié)扎。其余45只大鼠腹腔麻醉后，行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)，建立單側(cè)輸尿管梗阻模型。術(shù)后隨機(jī)分成模型組(B組，n=15)、單用貝那普利治療組(C組，n=15)及貝那普利聯(lián)合胰激肽原酶治療組(D組，n=15)。4組均在術(shù)前一天開始灌胃。A組和B組每只給予自來水2 ml，上午8:30～9:00灌胃，每日一次；C組給予貝那普利(10 mg.kg/d，溶于水中，制成2ml混懸液)灌胃，每日一次，時間同前。D組給予貝那普利(10 mg

6、/kg/d)及胰激肽原酶(150單位/kg/d)，溶于水中，制成2 ml混懸液灌胃，每日一次，時間同前3組。實(shí)驗(yàn)期間4組大鼠自由飲食、水。術(shù)后第3天、7天、14天分3批采取標(biāo)本，頸椎離斷處死后立即取出大鼠左腎組織，分別用于光鏡、蘇木素伊紅(HE)染色觀察病理形態(tài)，免疫組化染色檢測AngⅡ、TGF-β<,1>、PDGF-B，結(jié)果應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： 1 HE染色 A組未見異常，B組腎組織3天可見

7、腎小管輕度擴(kuò)張，問質(zhì)中少量單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞浸潤；7天可見腎小管擴(kuò)張，間質(zhì)中單核和淋巴細(xì)胞浸潤較多，腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性；14天可見腎小管明顯擴(kuò)張，間質(zhì)中單核和淋巴細(xì)胞彌漫浸潤，局灶性加重，纖維化明顯；C、D組分別與B組平行相比，腎小管擴(kuò)張、間質(zhì)中單核和淋巴細(xì)胞浸潤的程度明顯降低(P<0.05)。D組與C組平行相比，腎小管間質(zhì)病變程度明顯下降(P<0.05)。 2免疫組化 2．1 AnglI的表達(dá)：A組主要在近曲小管

8、表達(dá)，少量在遠(yuǎn)曲小管及腎小球表達(dá)；B組術(shù)后3天可見腎小管間質(zhì)AngⅡ的表達(dá)，且隨梗阻時間延長，表達(dá)量逐漸增加(P<0.05)；B組與A組相比有顯著性上升(P<0.05)；C、D組分別與B組平行相比AngⅡ表達(dá)減少(P<0.05)。D組與C組相比AngⅡ表達(dá)減少(P<0.05)。 2．2 TGF-β<,1>的表達(dá)：主要在腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)，少量在腎小球、腎小管間質(zhì)表達(dá)；B組TGF-β<,1>的表達(dá)第3天就開始上調(diào)，且隨著梗阻

9、時間的延長逐漸升高，而腎小球變化不明顯，與A組相比有顯著性升高(P<0.05)。C、D組術(shù)后第3天、第7天、第14天TGF-β<,1>表達(dá)均顯著低于同時期B組的表達(dá)(P<0.05)。D組術(shù)后第3天、第7天、第14天TGF-β<,1>表達(dá)均顯著低于同時期C組的表達(dá)(P<0.05)。 2．3 PDGF-B的表達(dá)：A組血小板源性生長因子(PDGF-B)在腎間質(zhì)細(xì)胞胞漿中有微弱表達(dá)，腎小管上皮細(xì)胞中偶有表達(dá)。B組7天時PDGF-B在間質(zhì)

10、細(xì)胞胞漿中表達(dá)增多，小管上皮細(xì)胞中也有表達(dá)， 14天表達(dá)一直處于較高水平，與A組相比有顯著性上升(P<0.05)；C、D組分別與B組平行相比，PDGF-B在腎間質(zhì)表達(dá)量有顯著性下降(P<0.05)。D組與C組相比PDGF-B表達(dá)減少(P<0.05)。 結(jié)論： 聯(lián)合應(yīng)用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑和胰激肽原酶，可減少AngⅡ的含量，下調(diào)PDGF-B、TGF-β<,1>的表達(dá)，抑制細(xì)胞外基質(zhì)增生、聚集，減輕腎間質(zhì)纖維化，延緩腎臟損