海南產(chǎn)芋螺毒管cDNA文庫(kù)毒素基因的篩選.pdf

1、芋螺(Conus)屬于軟體動(dòng)物門(mén)(Mollusa)腹足綱(Gastropoda)前鰓亞綱(Prosobranchia)狹舌目(Stenoglossa)的芋螺(Conidae)科，是一類能分泌有毒毒素的肉食性熱帶海洋軟體動(dòng)物，其分泌的毒素稱為芋螺毒素(Conotoxin，CTX)。芋螺毒素由10～46個(gè)氨基酸殘基組成的小分子多肽，富含二硫鍵。由于芋螺毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎，生物活性強(qiáng)，作用靶點(diǎn)的選擇性高，引起了全世界相關(guān)領(lǐng)域科學(xué)家們的普遍重視

2、，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于研制特異性診斷試劑以及開(kāi)發(fā)療效特異的新藥之中，并作為分子模型用于相關(guān)新藥的設(shè)計(jì)。構(gòu)建基因文庫(kù)是分離克隆新基因和獲得大量基因序列信息的有效途徑，而cDNA文庫(kù)技術(shù)在基因分離和克隆中具有重要的作用，并得到廣泛應(yīng)用，這也是進(jìn)行功能基因組研究的一條經(jīng)濟(jì)而快速的途徑，極大推進(jìn)了功能基因組的研究。由于芋螺資源的短缺、以及天然芋螺毒素含量甚微，借助這一現(xiàn)代基因工程技術(shù)分離克隆芋螺毒素基因，再根據(jù)這些基因的序列推導(dǎo)其編碼產(chǎn)生的芋螺毒素氨

3、基酸序列，然后對(duì)其進(jìn)行化學(xué)合成或重組表達(dá)，進(jìn)一步研究其生物活性，是研發(fā)芋螺毒素藥物的必要途徑。
　　 某導(dǎo)師課題組采用SMART方法構(gòu)建了海南產(chǎn)的桶形芋螺、勇士芋螺、疣縞芋螺和織錦芋螺毒管的cDNA文庫(kù)。本研究在此基礎(chǔ)上，采用3'RACE方法，對(duì)上述4種芋螺毒管的cDNA文庫(kù)進(jìn)行毒素基因的篩選。分別以cDNA文庫(kù)菌液及其質(zhì)粒為模板，根據(jù)已知超家族芋螺毒素基因保守的信號(hào)肽序列，設(shè)計(jì)各個(gè)家族的5'-端上游特異引物，分別與3'-末端的