海南產芋螺毒管cDNA文庫毒素基因的篩選.pdf

1、芋螺(Conus)屬于軟體動物門(Mollusa)腹足綱(Gastropoda)前鰓亞綱(Prosobranchia)狹舌目(Stenoglossa)的芋螺(Conidae)科，是一類能分泌有毒毒素的肉食性熱帶海洋軟體動物，其分泌的毒素稱為芋螺毒素(Conotoxin，CTX)。芋螺毒素由10～46個氨基酸殘基組成的小分子多肽，富含二硫鍵。由于芋螺毒素的化學結構新穎，生物活性強，作用靶點的選擇性高，引起了全世界相關領域科學家們的普遍重視

2、，現已廣泛應用于研制特異性診斷試劑以及開發(fā)療效特異的新藥之中，并作為分子模型用于相關新藥的設計。構建基因文庫是分離克隆新基因和獲得大量基因序列信息的有效途徑，而cDNA文庫技術在基因分離和克隆中具有重要的作用，并得到廣泛應用，這也是進行功能基因組研究的一條經濟而快速的途徑，極大推進了功能基因組的研究。由于芋螺資源的短缺、以及天然芋螺毒素含量甚微，借助這一現代基因工程技術分離克隆芋螺毒素基因，再根據這些基因的序列推導其編碼產生的芋螺毒素氨

3、基酸序列，然后對其進行化學合成或重組表達，進一步研究其生物活性，是研發(fā)芋螺毒素藥物的必要途徑。
　　 某導師課題組采用SMART方法構建了海南產的桶形芋螺、勇士芋螺、疣縞芋螺和織錦芋螺毒管的cDNA文庫。本研究在此基礎上，采用3'RACE方法，對上述4種芋螺毒管的cDNA文庫進行毒素基因的篩選。分別以cDNA文庫菌液及其質粒為模板，根據已知超家族芋螺毒素基因保守的信號肽序列，設計各個家族的5'-端上游特異引物，分別與3'-末端的