ZFAS1在結直腸癌中的表達及其促進腫瘤轉移的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分：ZFAS1在結直腸癌組織中的表達及其臨床意義
　　目的:
　　檢測ZFAS1在結直腸癌組織中的表達水平，并分析其與臨床病理參數(shù)及預后的關系。
　　方法:
　　應用qRT-PCR方法檢測159對結直腸癌組織及癌旁組織的ZFAS1表達量，比較兩者ZFAS1表達量的差異，同時檢測了12例結直腸癌肝轉移患者原發(fā)腫瘤及轉移灶組織ZFAS1的表達?？ǚ綑z驗分析ZFAS1表

2、達水平與臨床病理參數(shù)的相關性;采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，Log-Rank方法比較ZFAS1高表達組和低表達組之間的生存率;采用Cox比例風險模型進行多因素分析，以確定校正多因素作用后ZFAS1對預后的影響。
　　結果:
　　159例結直腸癌組織及其配對正常組織ZFAS1的表達檢測結果顯示，ZFAS1在結直腸癌中表達顯著上調(P＜0.0001)，其中有76例患者的ZFAS1表達在結直腸癌組織中較正常上調2倍

3、以上;且肝轉移組織中ZFAS1的表達量明顯高于原發(fā)部位（P＜0.05）。結直腸癌組織中ZFAS1的表達與淋巴結轉移(P=0.045)及TNM分期（P=0.003）呈正相關。與低表達ZFAS1的患者相比，ZFAS1高表達的患者表現(xiàn)出更差的預后，其無瘤生存時間(P=0.012)及總生存時間均更短(P=0.003)。多因素分析顯示，ZFAS1是結直腸癌患者無瘤生存時間(HR=2.132，95％ CI=1.015-4.546，P=0.048)與

4、總生存時間(HR=1.878，95％ CI=1.006-3.529，P=0.0492)的獨立預后因素。
　　結論:
　　ZFAS1在結直腸癌組織中高表達，并與淋巴結轉移及高的TNM分期相關。ZFAS1是結直腸癌患者腫瘤復發(fā)和死亡的獨立預后因素。
　　第二部分：ZFAS1對結直腸癌細胞遷移與侵襲的影響
　　目的:
　　研究ZFAS1對結直腸癌細胞增殖、遷移與侵襲的影響。
　　方法:
　　檢測結直腸

5、癌細胞株中ZFAS1的表達，選擇兩株表達量較高的細胞系，應用siRNA技術干擾ZFAS1的表達;采用CCK-8方法研究ZFAS1基因沉默后結直腸癌細胞增殖能力的變化;應用細胞劃痕實驗與Transwell侵襲小室方法研究ZFAS1基因沉默對結直腸癌細胞遷移和侵襲能力的影響;采用分子克隆技術構建ZFAS1shRNA慢病毒表達載體，包裝病毒后感染結直腸癌細胞，構建ZFAS1穩(wěn)定敲降細胞株;采用裸鼠尾靜脈注射肺轉移實驗，研究ZFAS1基因沉默對

6、結直腸癌細胞體內轉移能力的影響。
　　結果:
　　ZFAS1基因沉默對結直腸癌細胞增殖沒有明顯影響;沉默ZFAS1能夠抑制結腸癌細胞的體外遷移與侵襲能力及裸鼠肺轉移。
　　結論:
　　ZFAS1能夠抑制結直腸癌細胞的遷移、侵襲和轉移。
　　第三部分：ZFAS1影響結直腸癌轉移機制的初步研究
　　目的:
　　初步研究ZFAS1影響結直腸癌細胞轉移的作用機制。
　　方法:
　　應用qRT

7、-PCR法及Western blot法檢測在ZFAS1穩(wěn)定敲降的結直腸癌細胞中EMT相關基因的表達;應用siRNA技術干擾ZEB1的表達，驗證ZEB1與E-鈣粘素(E-cad)及波形蛋白(VIM)的關系;雙熒光素酶實驗驗證ZEB1是否是miR-150-5p的靶基因;應用細胞劃痕實驗與Transwell侵襲小室方法研究miR-150-5p與ZEB1對結直腸癌細胞遷移和侵襲能力的影響;通過熒光素酶實驗、細胞劃痕實驗及Transwell侵襲小

8、室方法研究ZFAS1與miR-150-5p的關系。
　　結果:
　　ZFAS1敲降后，結直腸癌細胞中上皮細胞標志E-cad表達顯著上升，而間質細胞標志VIM和ZEB1表達顯著下降;ZEB1能夠調節(jié)E-cad及VIM的表達;miR-150-5p通過靶向作用于ZEB1抑制結直腸癌細胞的遷移與侵襲;ZFAS1與miR-150-5p結合，封閉了miR-150-5p的抑癌作用。
　　結論:
　　ZFAS1與miR-150-