MicroRNA-301a在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及其機制.pdf

1、【目的】：
　　結(jié)直腸癌（Colorectal cancer，CRC）是世界多發(fā)惡性腫瘤之一，其在包括中國在內(nèi)的發(fā)展中國家的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。雖然近年來在結(jié)直腸癌的診斷和治療的思維和方法上取得了不小的進(jìn)步，但仍有近一半的結(jié)直腸癌患者死于腫瘤進(jìn)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，腫瘤轉(zhuǎn)移仍然是結(jié)直腸癌患者的主要死亡原因。所以，探索和發(fā)現(xiàn)針對轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的新的特異性腫瘤標(biāo)記物以及靶向治療新靶點是目前最值得醫(yī)學(xué)工作者關(guān)注的問題之一。MicroRNAs(

2、miRNAs)是一類內(nèi)源性非編碼的小RNA，可以通過轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶蛋白表達(dá)而發(fā)揮多種生物學(xué)作用。研究表明，許多miRNAs以癌基因或抑癌基因的方式參與包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。對miRNAs在結(jié)腸癌病理機制中的深入研究可能為轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的早期診斷及個體化和有效治療帶來新的希望。本研究擬從對結(jié)直腸癌組織中miR-301a的監(jiān)測入手，探討miR-301a在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移侵襲過程中的調(diào)控作用，并以此為基礎(chǔ)尋找抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的潛在靶

3、點，為結(jié)直腸癌的抗轉(zhuǎn)移治療提供新的路徑。
　　【材料與方法】：
　?。?）實時定量PCR（qRT-PCR）方法檢測miR-301a在48對結(jié)直腸癌組織和癌旁組織以及5種結(jié)腸癌細(xì)胞株（HT-29，SW-620，LOVO，HCT-116,SW-480）和永生化腸上皮細(xì)胞NCM-460中mir-301a的表達(dá)，并進(jìn)一步分析miR-301a與患者臨床病理資料的關(guān)系。
　?。?）分別轉(zhuǎn)染miR-301a inhibitor和mi

4、R-301a mimics下調(diào)HCT-116細(xì)胞和上調(diào)SW-480細(xì)胞miR-301a表達(dá)水平，體外實驗觀察miR-301a對這2種結(jié)腸癌細(xì)胞株侵襲、遷移及增殖能力的影響
　?。?）預(yù)測靶基因，然后采用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測,qRT-PCR和免疫印跡的方法，驗證miR-301a的靶基因，初步明確miR-301a在結(jié)腸癌細(xì)胞中發(fā)揮生物學(xué)作用的分子機制。
　　【結(jié)果】：
　?。?）qRT-PCR檢測結(jié)果表明miR-301a

5、全部腫瘤組織中的表達(dá)與對應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)（4.08±1.40）較其對應(yīng)的癌旁組織以及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織（3.16±1.70、3.22±1.05）的表達(dá)水平高（P<0.05）。而腫瘤組織中miR-301a的表達(dá)與患者性別、年齡，腫瘤位置、分化程度無關(guān)(P>0.05)。5種結(jié)腸癌細(xì)胞中miR-301a的表達(dá)水平均較NCM-460高，其中SW-620和HCT-116細(xì)胞表達(dá)

6、較高，而SW-480細(xì)胞表達(dá)最低。
　?。?）抑制miR-301a表達(dá)水平能有效抑HCT-116細(xì)胞遷移及侵襲，也能抑制細(xì)胞增殖；過表達(dá)miR-301a的SW-480細(xì)胞的體外侵襲、遷移能力明顯增強，而細(xì)胞增殖能力無明顯變化。
　?。?）預(yù)測并篩選出 miR-301a的一個潛在靶基因 TGFBR2。RT-PCR及Immunoblot證實miR-301a對TGFBR2 mRNA表達(dá)無影響，但可以抑制其蛋白表達(dá)。雙熒光素酶報告基