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文檔簡(jiǎn)介
1、胰腺癌是一種惡性程度極高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,其發(fā)病隱匿,進(jìn)展快,預(yù)后差,大約80%的患者確診時(shí)往往伴有局部的侵犯或者轉(zhuǎn)移,5年生存4%,胰腺癌的臨床治療主要以外科手術(shù)治療,放化療為主。蛋氨酸腦啡肽(methionine-enkephalin,MENK)是1975年Hughes等從豬腦提取液中分離出來(lái)具有內(nèi)源性嗎啡樣活性的物質(zhì),人們發(fā)現(xiàn)其受體在免疫細(xì)胞以及某些腫瘤組織和正常組織細(xì)胞均有分布,MENK通過(guò)與免疫細(xì)胞上受體結(jié)合發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用
2、,通過(guò)與腫瘤細(xì)胞上的受體結(jié)合發(fā)揮抑制腫瘤的作用。納曲酮(naltrexone,NTX)是美國(guó)杜邦公司1963年合成并研究開(kāi)發(fā)的一種非選擇性阿片受體拮抗劑,能阻斷阿片類物質(zhì)與阿片受體結(jié)合,人們發(fā)現(xiàn)間斷性的給予NTX6-8小時(shí)后,會(huì)出現(xiàn)一個(gè)18小時(shí)到72小時(shí)的窗口期,在窗口期內(nèi),腫瘤細(xì)胞受到抑制。與此同時(shí),NTX在低劑量時(shí)具有免疫調(diào)節(jié)作用。因此,基于MENK與NTX直接抗腫瘤作用與激活免疫細(xì)胞間接抗腫瘤作用,本文將MENK與NTX聯(lián)合應(yīng)用,
3、進(jìn)行荷瘤小鼠的體內(nèi)外試驗(yàn),通過(guò)對(duì)不同給藥劑量以及不同給藥時(shí)間的研究,從直接抗腫瘤與激活免疫系統(tǒng)間接抗腫瘤兩個(gè)角度進(jìn)行研究,探討MENK與NTX聯(lián)合使用治療胰腺癌的可行性,為腫瘤臨床治療提供新的途徑。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br> 通過(guò)單獨(dú)應(yīng)用MENK、NTX與聯(lián)合應(yīng)用MENK與NTX的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),探討MENK、NTX及二者聯(lián)合時(shí)對(duì)胰腺癌的抑制作用。
實(shí)驗(yàn)方法:
1.體外實(shí)驗(yàn)中,MTS方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組中胰腺癌增殖細(xì)胞
4、的抑制情況;
2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)建立胰腺癌荷瘤小鼠模型,檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)處理組中胰腺癌的抑制情況。
3.WB法檢測(cè)荷瘤小鼠胰腺癌組織阿片受體蛋白表達(dá)量;
4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞亞群(CLT、Treg、NK、γδT)的增殖情況。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
1.在體外實(shí)驗(yàn)中,MENK在濃度為10-6M時(shí)對(duì)胰腺癌細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng);NTX在濃度為10-5M時(shí)對(duì)胰腺癌細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng);二者相比較,M
5、ENK的作用更加顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
2.在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,MENK與NTX聯(lián)合應(yīng)用在48小時(shí)后與對(duì)照組相比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在96小時(shí)與MENK組與NTX組相比較抑癌率升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
3.在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,在1次/24h的給藥方式下, MENK在劑量為20mg/kg時(shí)抑癌效果最顯著;NTX在劑量為5mg/kg時(shí)抑癌效果最顯著;MENK組與NTX組相比較作用更加顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
4.MENK與NT
6、X聯(lián)合應(yīng)用時(shí),MENK在劑量為20mg/kg/1次/24h與NTX在劑量為5mg/kg/1次/96h給藥方式時(shí),抑癌效果最顯著,與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
5.Western-blot技術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠腫瘤組織阿片受體的蛋白的表達(dá)含量
NTX組與MENK+NTX組腫瘤組織阿片受體蛋白表達(dá)量增加, NTX組高于MENK+NTX組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
6.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞亞群增殖情況
M
7、ENK組、NTX組與MENK+NTX組都可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞亞群(CTL、NK、γδT)增殖,抑制Treg增殖,與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
1、MENK在體內(nèi)外能夠抑制胰腺癌細(xì)胞增殖,NTX在體內(nèi)外能夠抑制胰腺癌細(xì)胞增殖,兩者相比MENK作用更加顯著;
2、MENK與NTX聯(lián)合應(yīng)用,在NTX給藥72小時(shí)后具有協(xié)同作用
3、NTX在體內(nèi)能夠上調(diào)腫瘤組織阿片受體的蛋白表達(dá);
4、M
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