玻璃化凍存小鼠腦細(xì)胞的研究.pdf

1、本文以成年ICR小鼠為實(shí)驗(yàn)材料,進(jìn)行玻璃化凍存小鼠腦細(xì)胞的研究。實(shí)驗(yàn)主要分為兩部分：一方面檢測預(yù)平衡時(shí)間和溫度對腦細(xì)胞存活率的影響,分析兩組玻璃化溶液(VSi, i=1～6和VSx,X=a～e)對細(xì)胞的毒性,得出合適的預(yù)平衡時(shí)間和溫度；另一方面檢測凍存后小鼠腦細(xì)胞的回收率、存活率、SDH酶活性,觀察細(xì)胞膜完整性,篩選出適合小鼠腦細(xì)胞玻璃化凍存的玻璃化溶液。 預(yù)平衡時(shí)間和溫度的選擇：經(jīng)過對預(yù)平衡后洗脫的細(xì)胞的存活率的檢測,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞

2、的存活率隨預(yù)平衡處理時(shí)間的延長而逐漸減小,其中2 min組和4 min組之間的差異不顯著(P>0.05),因而選擇4 min為最佳預(yù)平衡時(shí)間。在預(yù)平衡溫度篩選實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞存活率較高的是0℃,即0℃為最佳預(yù)平衡溫度。 玻璃化溶液的篩選：通過對凍存后細(xì)胞的回收率、存活率、SDH活性的檢測,分析認(rèn)為玻璃化溶液VS2和VSb對小鼠腦細(xì)胞的凍存效果較好,其組成分分別為：VS2: 12％EG、16％DMSO、14％乙酰胺、6％丙三醇、0.7

3、 M的蔗糖和6％聚乙二醇；VSb: 14％DMSO、16％乙酰胺、0.15 M海藻糖和2％聚乙二醇。 玻璃化凍存對細(xì)胞活性的影響：檢測凍存后腦細(xì)胞的回收率,發(fā)現(xiàn)回收率隨凍存時(shí)間的延長而減少,但減少幅度較小。SDH活性在凍存的前20 d中下降程度明顯,20 d以后下降幅度變小,20 d組和30 d組沒有顯著差異(P>0.05)。凍存時(shí)間的延長影響細(xì)胞膜的完整性,時(shí)間越長,細(xì)胞膜受損程度越嚴(yán)重。 玻璃化凍存過程中,由于保護(hù)劑