海藻糖對神經(jīng)干細胞玻璃化凍存過程影響的研究.pdf

1、為獲得來源方便的神經(jīng)干細胞，開展有效的干細胞移植及建立干細胞庫，需長期低溫保存神經(jīng)干細胞。本文研究了神經(jīng)干細胞在培養(yǎng)過程中海藻糖的影響和海藻糖的玻璃化能力，并進行神經(jīng)干細胞的玻璃化凍存過程的研究。 首先，對海藻糖在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)過程的影響進行了研究。在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)過程中分別加入0mol/L、0.3mol/L、0.15 mol/L、0.075 mol/L、0.05 mol/L、0.025 mol/L的海藻糖，通過CCK-8試劑

2、盒連續(xù)六天進行測試，結果顯示在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)過程加入海藻糖不會影響細胞的增值，同時保持了其干細胞的特征，并且可以誘導分化為神經(jīng)元、少突膠質細胞、星型膠質細胞，從而確保了海藻糖應用于神經(jīng)干細胞玻璃化凍存的安全性。 其次，通過低溫冷臺和差示掃描量熱實驗，對海藻糖與蔗糖的玻璃化能力進行了比較，主要考察了玻璃化轉變溫度和反玻璃化的情況。在低溫冷臺上在100℃/min降溫速率下，60％海藻糖和60％蔗糖均能實現(xiàn)玻璃化，但在以相同升溫速

3、率復溫的過程中都有反玻璃化現(xiàn)象，60％蔗糖比60％海藻糖反玻璃化嚴重。在100℃/min降溫速率下，海藻糖能夠實現(xiàn)玻璃化的最低濃度是55％，而蔗糖能夠實現(xiàn)玻璃化的最低濃度是58％。采用差示熱量掃描技術測量樣品的玻璃化轉變溫度，60％海藻糖、55％海藻糖、60％蔗糖和58％蔗糖溶液玻璃化轉變溫度分別為-29.7℃、-30.8℃、-39.4℃和-45.6℃。 最后，將海藻糖與二甲基亞楓、乙二醇、乙酰胺組成聯(lián)合冷凍保護劑用于神經(jīng)干細

4、胞的玻璃化凍存。通過在冷臺上動態(tài)直觀地觀察，以及玻璃化凍存神經(jīng)干細胞復蘇率的比較，優(yōu)選出了適合神經(jīng)干細胞玻璃化凍存的冷凍保護劑組成為：20％(v/v)二甲基亞砜(DMSO)+20％(v/v)乙二醇(EG)+10％(w/v)乙酰胺(Acetamide)+0.5(M)海藻糖(Tretlalose)。將優(yōu)選出的冷凍保護劑分別用于兩種神經(jīng)干細胞的玻璃化凍存，一種是培養(yǎng)過程沒有加入海藻糖，另外一種是培養(yǎng)過程加入0.05mol/L的海藻糖，實驗結果