海藻糖對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍存過(guò)程影響的研究.pdf

1、為獲得來(lái)源方便的神經(jīng)干細(xì)胞，開(kāi)展有效的干細(xì)胞移植及建立干細(xì)胞庫(kù)，需長(zhǎng)期低溫保存神經(jīng)干細(xì)胞。本文研究了神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中海藻糖的影響和海藻糖的玻璃化能力，并進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞的玻璃化凍存過(guò)程的研究。 首先，對(duì)海藻糖在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程的影響進(jìn)行了研究。在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中分別加入0mol/L、0.3mol/L、0.15 mol/L、0.075 mol/L、0.05 mol/L、0.025 mol/L的海藻糖，通過(guò)CCK-8試劑

2、盒連續(xù)六天進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程加入海藻糖不會(huì)影響細(xì)胞的增值，同時(shí)保持了其干細(xì)胞的特征，并且可以誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞，從而確保了海藻糖應(yīng)用于神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍存的安全性。 其次，通過(guò)低溫冷臺(tái)和差示掃描量熱實(shí)驗(yàn)，對(duì)海藻糖與蔗糖的玻璃化能力進(jìn)行了比較，主要考察了玻璃化轉(zhuǎn)變溫度和反玻璃化的情況。在低溫冷臺(tái)上在100℃/min降溫速率下，60％海藻糖和60％蔗糖均能實(shí)現(xiàn)玻璃化，但在以相同升溫速

3、率復(fù)溫的過(guò)程中都有反玻璃化現(xiàn)象，60％蔗糖比60％海藻糖反玻璃化嚴(yán)重。在100℃/min降溫速率下，海藻糖能夠?qū)崿F(xiàn)玻璃化的最低濃度是55％，而蔗糖能夠?qū)崿F(xiàn)玻璃化的最低濃度是58％。采用差示熱量掃描技術(shù)測(cè)量樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，60％海藻糖、55％海藻糖、60％蔗糖和58％蔗糖溶液玻璃化轉(zhuǎn)變溫度分別為-29.7℃、-30.8℃、-39.4℃和-45.6℃。 最后，將海藻糖與二甲基亞楓、乙二醇、乙酰胺組成聯(lián)合冷凍保護(hù)劑用于神經(jīng)干細(xì)

4、胞的玻璃化凍存。通過(guò)在冷臺(tái)上動(dòng)態(tài)直觀地觀察，以及玻璃化凍存神經(jīng)干細(xì)胞復(fù)蘇率的比較，優(yōu)選出了適合神經(jīng)干細(xì)胞玻璃化凍存的冷凍保護(hù)劑組成為：20％(v/v)二甲基亞砜(DMSO)+20％(v/v)乙二醇(EG)+10％(w/v)乙酰胺(Acetamide)+0.5(M)海藻糖(Tretlalose)。將優(yōu)選出的冷凍保護(hù)劑分別用于兩種神經(jīng)干細(xì)胞的玻璃化凍存，一種是培養(yǎng)過(guò)程沒(méi)有加入海藻糖，另外一種是培養(yǎng)過(guò)程加入0.05mol/L的海藻糖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果