綠僵菌轉(zhuǎn)化16α、17α-環(huán)氧黃體酮的工藝研究.pdf

1、本課題主要實(shí)驗(yàn)一種新的16a、17a-環(huán)氧黃體酮轉(zhuǎn)化菌種一綠僵菌，先用一般生產(chǎn)上用的直接投底物法進(jìn)行嘗試，并對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)綠僵菌羥化能力很強(qiáng)，在2％投料濃度下?lián)u瓶轉(zhuǎn)化率可達(dá)到70％左右，但在100L，發(fā)酵罐中放大卻達(dá)不到期望的轉(zhuǎn)化率，只有40％左右。通過檢測(cè)溶氧，發(fā)現(xiàn)溶解氧很低，在投底物時(shí)溶氧濃度只有3％的溶氧飽和度，確定了溶氧是限制綠僵菌轉(zhuǎn)化能力的主要因素。 為了改善溶氧，試驗(yàn)了靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化工藝，通過對(duì)轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化

2、，得到了靜息細(xì)胞工藝的最優(yōu)參數(shù)，以1％的量接種于搖瓶種子發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃，180r/min培養(yǎng)40h左右。再以5％接種量將種子發(fā)酵液接種于二級(jí)培養(yǎng)基中，發(fā)酵條件不變，培養(yǎng)23h左右，過濾120ml發(fā)酵液的菌絲，再把菌絲投入100ml緩沖溶液中，溫度30℃，180r/min，繼續(xù)轉(zhuǎn)化30h。發(fā)酵結(jié)束，轉(zhuǎn)化率60％左右，隨后在100L發(fā)酵罐中放大，轉(zhuǎn)化率為45％左右。 為了解決溶氧問題，先在搖瓶上試驗(yàn)，從減少菌體生物量入手，采用

3、添加抑制劑、減少營(yíng)養(yǎng)、稀釋菌體來解決生物量和轉(zhuǎn)化率問題，發(fā)現(xiàn)在接種時(shí)添加1％的乙醇，可對(duì)生物量有一定的減少作用，并且有促進(jìn)轉(zhuǎn)化的作用。稀釋菌體可有效減少生物量，轉(zhuǎn)化率也下降較少。 對(duì)稀釋菌體進(jìn)行了優(yōu)化和補(bǔ)充，形成了稀釋補(bǔ)料工藝，工藝參數(shù)為1m1孢子懸液接種于100ml(500 ml三角瓶)發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃，搖床180r/min，培養(yǎng)48h后，將發(fā)酵液按1：1量添加無菌水稀釋發(fā)酵液，然后加入2％底物，氧化8h、20h分別加入0