海洋真菌羥基化環(huán)氧黃體酮的菌株篩選及其代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、腎上腺皮質(zhì)激素藥物，作為甾體激素類藥物的重要組成部分，在臨床中應用廣泛。其中C11-羥基的引入是重要的甾體轉(zhuǎn)化反應之一，引入方法主要有化學法和生物轉(zhuǎn)化法，由于生物轉(zhuǎn)化法具有一步引入、專一性強、環(huán)境污染小的優(yōu)點，所以應用最為廣泛。本論文以環(huán)氧黃體酮為底物，以海洋真菌為主進行了羥基化環(huán)氧黃體酮的菌株篩選和轉(zhuǎn)化條件的研究，期望得到甾體激素藥物生物轉(zhuǎn)化的新工藝。
　　考慮到海洋真菌獨特的生長環(huán)境，以海洋真菌MNP07010101為研究對象

2、，通過對其菌體浸膏和發(fā)酵液浸膏的活性測定，確定活性部分的極性區(qū)域，從而有效的指導了海洋真菌代謝產(chǎn)物的分離，最后得到具有生物活性的海洋真菌代謝產(chǎn)物。本論文得出如下結論:
　　(1)通過薄層層析色譜法、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術研究了8株海洋真菌對環(huán)氧黃體酮的轉(zhuǎn)化情況，篩選出活性菌株MNP07010101具有11-羥化能力，并通過菌種鑒定為海洋產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum)，該菌株對環(huán)氧黃體酮具

3、有11-羥化能力為首次報道;
　　(2)對海洋真菌MNP07010101發(fā)酵液依次進行乙酸乙酯萃取、高效液相色譜法分析、半制備液相色譜法分離，得到6個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，鑒定了其中2個化合物結構，確定為11α-羥基環(huán)氧黃體酮和11β-羥基環(huán)氧黃體酮;
　　(3)對11α-羥基環(huán)氧黃體酮轉(zhuǎn)化工藝進行優(yōu)化，確立海洋真菌MNP07010101最佳培養(yǎng)基組分為:葡萄糖3％，玉米漿2.5％，硫酸銨0.16％，酵母浸出粉0.08％;發(fā)酵液初始最佳

4、pH值為5，最適投料時機是菌絲體培養(yǎng)36h時，最適接種量為6％，最適搖床轉(zhuǎn)速為180r·min-1，最佳轉(zhuǎn)化時間為36h;確立了3％乙醇懸浮投料為最適宜的投料方式。
　　(4)對海洋真菌MNP07010101培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，確立麥芽培養(yǎng)基（海水∶水=2∶8），培養(yǎng)21 d為較適培養(yǎng)條件，并大量培養(yǎng)，制備其菌體和發(fā)酵液浸膏。
　　(5)通過DPPH自由基清除能力實驗、胰蛋白酶抑制實驗、抗腫瘤活性實驗發(fā)現(xiàn)海洋真菌MNP0701