酪蛋白激酶(CK2)和人造血相關的PBX相互作用蛋白質(HPIP)在人腦膠質瘤中的表達及分析.pdf

1、目的：本實驗通過對不同級別人腦膠質瘤組織及正常腦組織中的酪蛋白激酶CK2及人造血相關的PBX相互作用蛋白HPIIP表達含量的測定，探討人腦膠質瘤中酪蛋白激酶CK2和人造血相關的PBX相互作用蛋白HPIP在腦膠質瘤中的表達意義及兩者的相關性。
　　方法：收集自2014年4月到2015年9月河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院神經(jīng)外科人腦膠質瘤組織標本64例，已取得病例標本病理診斷明確，由河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院病理科有經(jīng)驗或高年資主任醫(yī)師按照 WHO腦

2、腫瘤分級診斷標準完成，其中I級人腦膠質瘤9例，II級人腦膠質瘤17例，III級人腦膠質瘤18例，IV級人腦膠質瘤11例。正常腦組織的病理標本均來自因顱腦外傷或顱內出血病患需要行內減壓術所取的腦組織標本，共取13例作為對照組。本次實驗研究所收集的人腦膠質瘤病理診斷，均為首診，在手術前均未采取任何放療及化療等抗腫瘤治療措施。所有實驗用的標本，均是手術中切除病理組織標本后，快速取材，分別以10％的福爾馬林液和-80度液氮保存待用。所取標本分為

3、以下五組：正常腦組織組，I級膠質瘤組，II級膠質瘤組，III級膠質瘤組，IV級膠質瘤組。其中低級別膠質瘤 I～II級，高級別膠質瘤III～IV級。采用免疫組織化學方法IHC分別檢測CK2和HPIP在上述病理組織切片中的表達，采用統(tǒng)計軟件SPSS19.0分析，免疫熒光法檢測CK2和HPIP在同一病理切片內表達情況，分析其表達特點。應用Western Blot方法同測定上述每組標本CK2和HPIP的蛋白印跡情況，應用相關軟件Quantity

4、 One分別檢測各條帶的灰度值，根據(jù)灰度值在應用SPSS19.0軟件中進行統(tǒng)計分析后得出結論。
　　結果：
　　1、免疫組織化學IHC檢測結果統(tǒng)計描述，統(tǒng)計數(shù)據(jù)符合正態(tài)性檢驗以（x±s%）表示，得知：HPIP在正常腦組織，低級別人腦膠質瘤I～II級，陽性率分別為6.98±4.604%、25.54±20.093%、53.32±23.630%。而在高級別人腦膠質瘤III～IV級，表達陽性率分別達到73.69±15.539%、82

5、.79±16.246%，可見隨著腫瘤惡性程度不斷增高，HPIP表達量不斷增加，單因素方差分析（One-way ANOVA）結果統(tǒng)計量為14.736，P<0.01，Pearson等級相關分析得出的相關系數(shù)r=0.779，P<0.01，HPIP表達與腫瘤分級有關。腫瘤惡性程度分級越高，HPIP表達陽性率隨之越高，圖片見：Fig1～5。統(tǒng)計圖表詳見Table1、Table2。CK2正常腦組織，低級別人腦膠質瘤I～II級，陽性率分別為8.97±

6、8.379%、28.70±19.848%、45.75±24.881%。高級別人腦膠質瘤III～IV級表達陽性率分別為66.50±18.170%、76.67±16.887%，可得出隨著腫瘤惡性程度增高，CK2表達量增加。單因素方差分析（One-way ANOVA）結果統(tǒng)計量為9.680 P<0.01，Pearson等級相關分析得出相關系數(shù)r=0.712，P<0.01，CK2表達可與腫瘤分級呈正相關：CK2隨著腫瘤分級升高，而表達陽性率越高

7、。圖片見Fig.6~10、Table3、Table4。針對 HPIP與CK2的表達情況進行了相關性分析。Pearson等級相關分析得出的相關系數(shù)為r=0.922，P<0.01，即HPIP表達與CK2表達呈高度相關：隨著HPIP表達陽性率等級越高，CK2表達陽性率等級亦越高，詳見Table5。
　　2、免疫熒光結果分析得知；觀察兩種因子在同一病理組織標本中的分布情況?？梢娋G色熒光是CK2因子，而紅色熒光是HPIP因子，細胞核顯示為藍

8、色熒光。同一病理組織切片中兩種蛋白，分布表達共同定位在細胞核。詳見Fig11、Fig12、Fig13。
　　3、Western blot結果顯示：采用此方法對各組織標本的蛋白含量進行測定。觀察CK2、HPIP兩種蛋白，分別在正常腦組織對照組，低級別人腦膠質瘤 I～II級、高級別人腦膠質瘤 III～IV級的蛋白表達情況，檢測結果以測定的灰度值為標準。計算方法為目的條帶與GAPDH光密度的比值作為蛋白的相對表達量，實驗重復10遍，分析

9、HPIP、CK2的相對表達量，HPIP的相對表達量逐漸升高，CK2的相對表達量逐漸增高。各級別人腦膠質瘤組分別與正常腦組織組內比較，采用單因素方差分析(One-way ANOVA)。結果以均數(shù)±標準差SD表示，P<0.05，均有統(tǒng)計學意義。Pearson等級相關分析得出的相關系數(shù)為r=0.926，P<0.01，即隨著HPIP相對表達量升高，而CK2相對表達量升高。詳見Table6、Table7、Fig.14、Fig.15、Fig.16、

10、Fig.17、Fig.18、Fig.19。
　　結論：
　　1、CK2與HPIP在正常腦組織均呈陽性表達，在不同級別人腦膠質瘤都呈過表達。正常腦組織，低級別人腦膠質瘤I~II級，高級別人腦膠質瘤III～IV級三組之間以及兩兩組間的表達比較，均存在顯著性統(tǒng)計學意義。隨著人腦膠質瘤的惡性級別增高，CK2與HPIP表達量逐漸增高。表明在人腦膠質瘤的發(fā)展過程中，CK2與HPIP可能具有重要的作用，與人腦膠質瘤的惡性程度可能具有一定關