T790M及EMT在預(yù)測(cè)EGFR-TKI繼發(fā)耐藥后化療療效中的重要作用及機(jī)制.pdf

1、研究目的:表皮生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)已經(jīng)成為EGFR基因突變的晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的標(biāo)準(zhǔn)治療之一，然而EGFR-TKI的獲得性耐藥已成為影響其療效的瓶頸。目前化療仍是EGFR-TKI耐藥后的最重要治療手段，然而化療療效的預(yù)測(cè)和個(gè)體化至今難以實(shí)現(xiàn)，如何選擇更有效的化療方案意義重大。鑒于既往研究顯示:EGFR-TKI獲得性耐藥后對(duì)不同化療藥物敏感性不同，經(jīng)典的T790M突變和非經(jīng)典的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(EMT)等機(jī)

2、制與二線化療療效相關(guān)，我們首次提出科學(xué)假設(shè):EGFR-TKI的不同耐藥機(jī)制可能影響后續(xù)化療療效。
　　研究方法:通過(guò)EGFR-TKI誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞PC-9（EGFR突變型）和H460(EGFR野生型)獲得經(jīng)典的T790M突變的細(xì)胞株P(guān)C-9/ZD，EMT陽(yáng)性的耐藥細(xì)胞株P(guān)C-9/GR和H460/ER，CCK8法檢測(cè)不同肺癌細(xì)胞株對(duì)化療藥物的敏感性;通過(guò)RT-PCR、Western-blot檢測(cè)EGFR-TKI獲得性耐藥機(jī)制;siRN

3、A干擾下調(diào)T790M突變細(xì)胞的T790M基因、轉(zhuǎn)染CDH1后逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞EMT，檢測(cè)各細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性變化闡明T790M和EMT對(duì)化療敏感性的影響;裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證化療療效;裸鼠肺轉(zhuǎn)移模型檢測(cè)T790M突變和EMT陽(yáng)性對(duì)裸鼠肺轉(zhuǎn)移、生存的影響。
　　研究結(jié)果:1、對(duì)目前治療NSCLC的第三代化療藥物（吉西他濱、培美曲塞、紫杉醇、多西他塞、伊力替康），EGFR野生型肺癌細(xì)胞株H460的敏感性差于EGFR基因突變的細(xì)胞株P(guān)C

4、-9;而對(duì)順鉑的敏感性兩者無(wú)差異。2、EGFR-TKI獲得性耐藥后的PC-9/ZD細(xì)胞（T790M突變，EMT陰性）與親代PC-9細(xì)胞相比，對(duì)化療藥物（紫杉醇、多西他塞）的敏感增高，但對(duì)化療藥物（順鉑、吉西他濱、培美曲塞）的藥物敏感性無(wú)差異。PC-9/ZD(T790M突變，EMT陰性)對(duì)化療藥物敏感性（紫杉醇、多西他塞）優(yōu)于PC-9/GR（無(wú)T790M突變，EMT陽(yáng)性）。3、特異性下調(diào)EGFR和T790M突變基因后，NSCLC細(xì)胞株P(guān)C

5、-9/ZD對(duì)化療藥物（紫杉醇、多西他塞）敏感性均下降。4、EMT陽(yáng)性NSCLC細(xì)胞株(PC-9/GR和H460/ER)對(duì)化療藥物（順鉑、吉西他濱、培美曲塞、紫杉醇、多西他塞）敏感性差于親代PC-9和H460細(xì)胞株;TGF-β1作用肺癌細(xì)胞PC-9和H460后對(duì)上述化療藥物敏感性下降;PC-9/GR和H460/ER細(xì)胞轉(zhuǎn)染CDH1后逆轉(zhuǎn)EMT，可以恢復(fù)細(xì)胞對(duì)上述化療藥物的敏感性。5、EGFR-TKI獲得性耐藥細(xì)胞株，EMT陽(yáng)性肺癌細(xì)胞(P

6、C-9/GR)裸鼠肺轉(zhuǎn)移數(shù)目多于T790M突變細(xì)胞PC-9/ZD，進(jìn)一步影響裸鼠的生存（EMT陽(yáng)性PC-9/GR細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移裸鼠生存期短于T790M突變肺轉(zhuǎn)移裸鼠）。
　　研究結(jié)論:EGFR-TKI獲得性耐藥后細(xì)胞不同耐藥機(jī)制（T790M突變和EMT陽(yáng)性）影響后續(xù)的化療療效，T790M是紫杉類化療敏感性的指標(biāo)，EMT與化療耐藥有關(guān);T790M突變、EMT陽(yáng)性還是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后的指標(biāo)，有T790M突變的肺癌細(xì)胞株肺轉(zhuǎn)移數(shù)目少，預(yù)后好;