探討丹參多酚酸鹽對(duì)血管新生中miRNA-126和p38MAPK信號(hào)通路的影響.pdf

1、[目的]：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立心肌梗死模型，并給于丹參多酚酸鹽干預(yù)后，觀察相關(guān)指標(biāo)變化，明確丹參多酚酸鹽對(duì)MI血管新生中miRNA-126、p38MAPK信號(hào)通路的影響，進(jìn)一步探討丹參多酚酸鹽促血管新生的作用機(jī)制，為丹參多酚酸鹽的應(yīng)用推廣提供更充分的理論依據(jù)。
　　[方法]：
　　選取健康雄性SD大鼠80只，先隨機(jī)分為空白對(duì)照組（C組，n=10只）、假手術(shù)對(duì)照組（S組，n=10只）、急性心肌梗死組(60)。急性心肌梗死

2、組建立好心肌梗死模型后再隨機(jī)分為模型組（M組，n=13只）、丹參多酚酸鹽小劑量給藥組（LS組，n=12只）、丹參多酚酸鹽大劑量給藥組（HS組，n=13只）和麝香保心丸給藥組（SX組，n=13只）。HS、LS組在造模成功后分別予丹參多酚酸鹽30 mg/(kg·d)、15 mg/(kg·d)腹腔注射，而M組及S組則予相應(yīng)劑量的生理鹽水腹腔注射，1天/次，共7天，SX組予麝香保心丸50mg/(kg·d)（加入生理鹽水制成2mL懸濁液）灌胃，持

3、續(xù)4周，C組正常喂養(yǎng)。4周后，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組大鼠心梗周邊區(qū)微血管密度(MVD)、VEGF和P38 mapk的表達(dá)，采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)心梗周邊區(qū)miRNA-126、VEGFmRNA和P38mapkmRNA表達(dá)水平，ELISA檢測(cè)心臟組織中p38MAPK的活性。
　　[結(jié)果]：
　　1.心肌組織病理學(xué)觀察:
　　HE染色光鏡下觀察:①空白對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠心肌排列整齊，細(xì)胞核清晰;②模型組大鼠心

4、肌缺血區(qū)心肌細(xì)胞腫脹，部分細(xì)胞核溶解，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，梗死心肌纖維化，有少量血管新生;③與模型組相比，治療組（丹參多酚酸鹽大劑量、小劑量給藥組和麝香保心丸組）大鼠心肌炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，缺血區(qū)心肌細(xì)胞腫脹減輕，心肌細(xì)胞壞死減少，而且治療組大鼠與模型組比較可見(jiàn)大量血管新生。
　　2.免疫組化檢測(cè)心肌細(xì)胞CD34、VEGF和P38mapk蛋白的表達(dá)情況:①假手術(shù)組與空白對(duì)照組心肌細(xì)胞CD34、VEGF和P38mapk蛋白的表達(dá)無(wú)明顯差異(

5、P＞0.05);②與假手術(shù)組比較:模型組大鼠心肌CD34、VEGF和P38 mapk蛋白表達(dá)高于假手術(shù)組大鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);③與模型組比較:各治療組（丹參多酚酸鹽小劑量給藥組、丹參多酚酸鹽大劑量給藥組和麝香保心丸組）在大鼠心肌梗死交界區(qū)CD34、VEGF和P38mapk蛋白的表達(dá)均顯著高于模型組大鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);丹參多酚酸鹽大劑量給藥組CD34、VEGF和P38mapk蛋白的表達(dá)又高于小劑量給藥組(

6、P＜0.01)，與麝香保心丸給藥組無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　3.大鼠心肌梗塞邊緣區(qū)VEGFmRNA、P38mapkmRNA表達(dá)情況。①假手術(shù)組與空白對(duì)照組心肌細(xì)胞VEGFmRNA、P38mapkmRNA表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05);②與假手術(shù)組比較:模型組大鼠心肌VEGFmRNA、P38mapkmRNA表達(dá)高于假手術(shù)組大鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);③與模型組比較:各治療組在大鼠心肌梗死交界區(qū)VEGFmRNA、P3

7、8mapkmRNA表達(dá)均顯著高于模型組大鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);丹參多酚酸鹽大劑量給藥組VEGFmRNA、P38mapk mRNA表達(dá)又高于小劑量給藥組（P＜0.01），與麝香保心丸給藥組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　4.大鼠心肌梗塞邊緣區(qū)mir-126表達(dá)情況。①假手術(shù)組與空白對(duì)照組心肌細(xì)胞mir-126表達(dá)無(wú)明顯差異，均高于模型組(P＜0.05);②各治療組大鼠心肌梗死交界區(qū)mir-126表達(dá)均顯著高于模型組大

8、鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)③丹參多酚酸鹽大劑量給藥組mir-126表達(dá)又高于小劑量給藥組(P＜0.01)，與麝香保心丸給藥組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　5.大鼠心肌梗塞邊緣區(qū)P38mapk活性①假手術(shù)組與空白對(duì)照組心肌細(xì)胞P38 mapk活性較低，且無(wú)明顯差異(P＞0.05);②與假手術(shù)組比較:模型組大鼠心肌P38mapk活性高于假手術(shù)組大鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);③與模型組比較:各治療組在大鼠心肌梗死交界

9、區(qū)P38 mapk活性均顯著高于模型組大鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);丹參多酚酸鹽大劑量給藥組P38mapk活性又高于小劑量給藥組(P＜0.01)，與麝香保心丸給藥組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　[結(jié)論]：
　　1.結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支是建立大鼠MI模型的理想方法。
　　2.丹參多酚酸鹽能促進(jìn)大鼠心肌梗死區(qū)血管新生。其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA-126和p38MAPK信號(hào)通路，從而使VEGF表達(dá)增加，進(jìn)而促進(jìn)