丹參酮ⅡA對糖尿病大鼠氧化應激和p38MAPK信號通路的影響.pdf

1、目的：研究丹參酮IIA對糖尿病大鼠體內(nèi)氧自由基和p38MAPK信號通路的作用,同時觀察對高糖刺激的血管平滑肌細胞增殖和細胞中p38MAPK信號通路的影響,探討丹參酮IIA對糖尿病大鼠血管并發(fā)癥的作用機制。 方法： 1)腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型,組織貼壁法進行血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的原代培養(yǎng),SMA免疫組織化學

2、染色鑒定VSMC;2)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)半定量測定NADPH氧化酶p22phox、p47phox亞基mRNA的豐度；3)鋁酸法測定過氧化氫(H2O2)含量,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)分別用硫代巴比妥酸法(TBA)及黃嘌呤氧化酶法進行測定；4)BrdU(5-溴2-脫氧尿嘧啶)摻入DNA的ELISA法測定細胞DNA合成；5)western blot檢測p38MAPK蛋白的磷酸化水平。 結(jié)果：

3、 1)腹腔注射STZ 72h后連續(xù)三天測得空腹尾靜脈血糖＞12mmol·L-1,確認糖尿病模型建立成功；通過對原代培養(yǎng)的大鼠VSMC進行SMA免疫組織化學染色,發(fā)現(xiàn)其特有的肌纖維,確定所培養(yǎng)的細胞為VSMC;2)糖尿病大鼠血管中NADPH氧化酶p22phox、p47phox亞基mRNA表達量增多,表明該氧化酶活性增強；3)丹參酮II A可升高糖尿病大鼠血清中SOD活性,降低氧自由基(H2O2、MDA)含量；降低糖尿病大鼠血管組織中p38

4、MAPK蛋白的磷酸化水平；4)高糖可誘導VSMC增殖,并在一定的濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性；升高NADPH氧化酶p22phox、p47phox亞基mRNA的豐度；提高細胞中SOD水平,降低MDA含量；同時提高細胞內(nèi)p38MAPK蛋白的磷酸化水平,呈現(xiàn)濃度、時間依賴性；5)使用丹參酮IIA干預細胞后,高糖誘導的VSMC的增殖得到明顯抑制；同時升高高糖培養(yǎng)的細胞中的SOD活性,降低MDA含量；減少p38MAPK蛋白的磷酸化水平。 結(jié)論：