從p38MAPK信號通路探討MEBT-MEBO對大鼠慢性難愈合創(chuàng)面的修復(fù)機(jī)制.pdf

1、目的：從p38MAPK信號通路探討皮膚再生醫(yī)療技術(shù)（MEBT/MEBO）對大鼠慢性難愈合皮膚創(chuàng)面的修復(fù)機(jī)制。
　　方法：
　　（1）實(shí)驗(yàn)一：SPF級10～12周，體重在220g～250g之間，SD雄性大鼠40只，一周適應(yīng)性喂養(yǎng)，按照隨機(jī)原則抽取10只大鼠作為空白組，空白組大鼠僅作皮膚全層切除，不再進(jìn)行藥物干預(yù)。剩余30只大鼠注射醋酸氫化可的松形成慢性難愈合創(chuàng)面模型，隨機(jī)分為模型組、MEBO組和貝復(fù)濟(jì)組，每組10只。造模后第二

2、天用藥治療。換藥前各組均以1/5000呋喃西林溶液清潔創(chuàng)面，每天換藥2次。在造模后第3天、第7天、第14天觀察創(chuàng)面情況、測量并計(jì)算各組創(chuàng)面愈合率，觀察計(jì)算創(chuàng)面愈合時間。
　?。?）實(shí)驗(yàn)二：同實(shí)驗(yàn)一要求的大鼠80只，按照隨機(jī)原則抽取20只大鼠作為空白組，同實(shí)驗(yàn)一的造模方法，剩余60只大鼠隨機(jī)分為模型組、MEBO組和貝復(fù)濟(jì)組，每組20只。造模后第二天用藥治療。換藥方法及次數(shù)同實(shí)驗(yàn)一。在造模后第3天、第7天、第14天各組隨機(jī)處死5只，取

3、皮膚創(chuàng)面組織，一部分用10％福爾馬林固定以作病理切片，剩余部分立即放于液氮罐中，稍后迅速轉(zhuǎn)入-80℃超低溫冰箱。待標(biāo)本收集完畢做后續(xù)的Western blotting、RT-PCR、ELISA方法檢測。
　　結(jié)果：
　?。?）創(chuàng)面大體情況：空白組創(chuàng)面恢復(fù)最好，MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組情況顯著優(yōu)于模型組。
　?。?）創(chuàng)面愈合時間：空白組愈合時間最短（13.40±0.74d），與模型組相比有顯著差異（P＜0.01），模型組所需

4、時間最長（22.19±2.09d），與各組相比有顯著差異（F=141.900，P＜0.01），MEBO組愈合時間與貝復(fù)濟(jì)組無顯著差異（P＞0.05）。
　?。?）創(chuàng)面愈合率：在第3d，7d，14d，空白組愈合率與模型組相比有顯著差異（P＜0.05）；在第7d、第14d，MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組與模型組愈合率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MEBO組與貝復(fù)濟(jì)組比較，在第3d、14d，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但在第7d

5、相比，有顯著差異（P＜0.05）。
　　（4）Western blotting：①在整個創(chuàng)面愈合過程中，實(shí)驗(yàn)二各組大鼠創(chuàng)面肉芽組織中p38、MK2的含量呈逐漸遞減趨勢（P＜0.01），造模后第3天、第7天、第14天各時相點(diǎn)各組大鼠創(chuàng)面肉芽p38、MK2表達(dá)均無差異（P＞0.05）；②在創(chuàng)傷早期，模型組、MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組創(chuàng)面組織中p-p38、p-MK2表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在造模后第7天，各組間的差異開始明顯，空

6、白組、MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組表達(dá)量開始顯著下降，模型組下降趨勢不明顯，各組兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；造模后第14天，相比其他三組，模型組表達(dá)量仍處于較高水平（P＜0.05），MEBO組和貝復(fù)濟(jì)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?。?）RT-PCR：在整個實(shí)驗(yàn)過程中，與空白組相比，MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組、模型組的P38 mRNA、MK2 mRNA表達(dá)量在第3天時最多，隨后持續(xù)下降；造模后第3天，各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、（P＞0.05）；造模后第7天，MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組的表達(dá)量下降趨勢明顯，兩組之間有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；造模后第14天，MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組的表達(dá)量持續(xù)下降，兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但與模型組相比均有差異（P＜0.05），模型組仍處于高表達(dá)。
　?。?）ELISA：在實(shí)驗(yàn)過程中各組大鼠創(chuàng)面組織中的TNF-α、IL-6含量隨時間均呈下降趨勢，但以MEBO組下降最明顯，模型組下降最緩慢。造模后第3天，模型組、

8、MEBO組、貝復(fù)濟(jì)組表達(dá)量均高于空白組（P＜0.05），造模后第7天，模型組表達(dá)量仍高于其他三組（P＜0.05），造模后第14天模型組表達(dá)持續(xù)明顯高于其余各組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　（1）MEBT/MEBO能明顯縮短大鼠慢性難愈合創(chuàng)面的愈合時間、提高愈合率。
　?。?）MEBT/MEBO可以下調(diào)慢性難愈合創(chuàng)面組織中p-p38、p-MK2、p38 mRNA、MK2 mRNA的表達(dá)水平。
　　（3）MEB