降鈣素對軟骨細胞炎癥反應(yīng)及p38MAPK信號通路的影響.pdf

1、目的：本實驗通過觀察降鈣素對白介素1β（IL-1β）誘導(dǎo)的大鼠軟骨細胞中基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP-13）、Ⅱ型膠原（ColⅡ）、p38、P-p38及 c-myc表達的影響，探討降鈣素是否通過阻斷p38MAPK信號通路抑制IL-1β引起的大鼠軟骨細胞的炎性損傷。
　　方法：體外獲得、培養(yǎng)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞。采用甲苯胺藍及免疫細胞化學(xué)染色方法鑒定軟骨細胞。MTT法檢測細胞增殖率，確定實驗所需降鈣素濃度。將第2代軟骨細胞分為7組，分別為

2、：A組空白對照組，加入完全培養(yǎng)基；B組IL-1β誘導(dǎo)組，加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基；C組降鈣素對照組，加入含50ng/ml降鈣素的完全培養(yǎng)基；D組IL-1β+降鈣素干預(yù)組，加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基15min后再加50ng/ml降鈣素；E組 IL-1β+SB203580干預(yù)組，加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基15min后再加10μmol/L SB203580；F組降鈣素+SB203580聯(lián)

3、合對照組，加入含50ng/ml降鈣素和10μmol/L SB203580的完全培養(yǎng)基；G組IL-1β+降鈣素+SB203580聯(lián)合干預(yù)組，加入含10ng/ml IL-1β的完全培養(yǎng)基15min后再加入50ng/ml降鈣素和10μmol/L SB203580。24h后做相應(yīng)處理，用免疫細胞化學(xué)染色、Western Blot觀察和檢測 MMP-13、ColⅡ、p38、P-p38及 c-myc的表達情況。
　　結(jié)果：1、甲苯胺藍和Col

4、Ⅱ免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果說明體外培養(yǎng)細胞為軟骨細胞，能夠用來進行下一步實驗；2、MTT結(jié)果提示濃度在50-500ng/ml范圍的降鈣素對軟骨細胞抑制率無顯著差異，故實驗中的降鈣素濃度選取50ng/ml濃度。3、Western Blot結(jié)果：1）各組p38表達無顯著差異（P＞0.05）；P-p38在B組的表達顯著高于其它各組（P＜0.05），在 D、E、G組的表達高于A組而低于B組（P＜0.05），D、E、G組間無顯著差異（P＞0.05）；

5、2）c-myc和MMP-13在B組的表達顯著高于其他各組（P＜0.05），在 D、E組的表達高于A組而低于B組（P＜0.05），D、E組間無顯著差異（P＞0.05），在 G組的表達低于B、D、E組而高于A組（P＜0.05）；3）ColⅡ在 B組的表達顯著低于其它各組（P＜0.05），在D、E、G組的表達低于A組而高于B組（P＜0.05），D、E、G組間無顯著差異（P＞0.05）；各 A、C、F組間無顯著差異（P＞0.05）。4、對 MM