膜分離技術富集山茱萸抗風濕組分的適用性研究與評價.pdf

1、目的:以山茱萸水提液為研究對象，采用膜分離技術富集山茱萸總苷，通過體內、體外藥效學，研究膜分離技術對山茱萸水提液中山茱萸總苷類成分抗炎生物活性的影響，以評價膜分離技術應用于精制山茱萸水提液的適用性，為膜分離技術在中藥精制方面的進一步應用提供研究基礎。
　　方法:
　　1.采用LNG-CM-101實驗室小型微濾陶瓷膜設備（微濾膜孔徑：0.8μm、0.2μm和0.05μm）和LNG-HFM-101小型中空纖維超濾膜設備（超濾膜截

2、留分子量：50 kDa、10 kDa和6 kDa）對山茱萸水提液進行精制處理，以有效活性成分山茱萸總苷透過率和高分子（蛋白質、果膠、鞣質、淀粉）截留率為綜合評價指標，利用響應面法優(yōu)選山茱萸水提液的膜分離精制工藝。
　　2.采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法檢測山茱萸原液、膜微濾液及超濾液對人成纖維滑膜細胞（HFLS）增殖的影響，并檢測山茱萸各樣品對白介素（IL）-1β及腫瘤壞死因子（TNF）-α誘導的血管內

3、皮生長因子（VEGF）、白細胞介素（IL）-6的抑制作用，從體外藥效學方面評價膜分離技術富集山茱萸水提液抗炎組分的適用性。
　　3.通過建立佐劑性關節(jié)炎大鼠模型，測定山茱萸原液、膜微濾液、膜超濾液及白芍總苷（TGP）對AA大鼠足趾腫脹和體重的影響。用 ELISA法檢測佐劑性關節(jié)炎大鼠血清中IL-1、IL-6、前列腺素（PGE2）和TNF-α的含量，HE染色后通過顯微鏡法觀察病理切片，比較不同樣品對佐劑性關節(jié)炎大鼠的治療效果。

4、>　　結果:
　　1.山茱萸水提液膜微濾最佳工藝條件為：膜孔徑0.05μm，藥液溫度40-45℃，藥液質量濃度0.10 g·mL-1左右，過膜壓力0.07 MPa；膜超濾最佳工藝條件為：超濾膜截留分子量10 kDa，藥液溫度50-55℃，藥液質量濃度0.13 g·mL-1左右，過膜壓力0.10 MPa。山茱萸水提液經(jīng)膜精制后，溶液的濁度、黏度、粒徑、色差等理化參數(shù)得到明顯的改善，提高了溶液的澄明度，降低溶液中的懸浮性大顆粒及高分子

5、物質，且使有效成分得到了很好的保留。
　　2.體外藥效學實驗結果表明，山茱萸原液、膜微濾液及膜超濾液能有效抑制IL-1β誘導產(chǎn)生的過量炎癥細胞因子VEGF、TNF-α、IL-6和TNF-α誘導產(chǎn)生的過量的炎癥細胞因子VEGF、IL-6。山茱萸水提液經(jīng)膜精制后增強了其抗炎活性，且以膜超濾精制液抗炎活性最好。
　　3.體內藥效學實驗結果表明，山茱萸原液、膜微濾液及膜超濾液能顯著下調佐劑性關節(jié)炎（AA）大鼠血清中炎性細胞因子IL-

6、1、IL-6、PGE2、TNF-α的水平，改善AA大鼠的炎癥程度，其中以膜超濾精制液的效果最好。病理組織切片結果表明，山茱萸各樣品能抑制AA大鼠滑膜細胞增生，降低炎性細胞浸潤程度。
　　結論:采用響應面法優(yōu)化了山茱萸水提液的膜微濾及膜超濾工藝。通過對不同膜分離技術獲得的山茱萸樣品體外抗炎作用的研究，初步闡明了其作用機制與抑制滑膜細胞過度分泌炎性細胞因子有關。通過對不同膜分離技術獲得的山茱萸樣品的體內抗炎作用的研究，發(fā)現(xiàn)山茱萸水提液