基于抗生素親合作用的化學(xué)發(fā)光分析法檢測致病菌.pdf

1、致病菌是一種可通過空氣，食物，水和生物接觸等各種途徑入侵宿主并引起感染的微生物。其中，金黃色葡萄球菌是一種很常見的致病菌，能夠引起諸如腸炎，敗血癥，膿毒癥等嚴重感染，也是引起群體性食物中毒的第二大因素。變異鏈球菌是一種生長于口腔的致病菌，具有分泌酸性物質(zhì)腐蝕牙釉質(zhì)的特點，為人類主要致齲齒菌之一，在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被廣泛研究。因此，建立對這兩種致病菌快速，簡單，靈敏檢測的新方法對于疾病診斷具有重要的意義。
　　化學(xué)發(fā)光（Chemilum

2、inescence，簡稱為CL）分析法是分子發(fā)光光譜分析法中的一類，它主要是依據(jù)化學(xué)檢測體系中待測物濃度與化學(xué)發(fā)光強度在一定范圍內(nèi)呈線性定量關(guān)系的原理，利用儀器對反應(yīng)體系化學(xué)發(fā)光強度的檢測，來確定待測物含量的一種痕量分析方法。
　　本文基于化學(xué)發(fā)光分析法，結(jié)合抗生素親合作用和雙位點分子識別模式構(gòu)建了檢測致病菌的新方法。
　　1）基于抗生素功能化磁珠的化學(xué)發(fā)光分析法檢測金黃色葡萄球菌
　　本文基于抗生素功能化的磁珠構(gòu)建了

3、化學(xué)發(fā)光分析檢測金黃色葡萄球菌的方法。本研究選用萬古霉素作為其中一種分子識別試劑，偶聯(lián)在羧基化磁珠上，實現(xiàn)對金黃色葡萄球菌的高效富集和快速分離。同時，利用金黃色葡萄球菌表面的A蛋白可以與兔免疫球蛋白G（IgG）進行特異性結(jié)合作用的特點，同時使用堿性磷酸酶（ALP）標記的兔 IgG作為第二種分子識別試劑和信號示蹤物，在離心管中進行孵育后，通過磁性分離得到夾心復(fù)合物，即可檢測復(fù)合物的化學(xué)發(fā)光信號值。結(jié)果表明，金黃色葡萄球菌的濃度在12-1.

4、2×106CFU mL-1范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強度呈良好的線性關(guān)系，檢測限為3.3CFU mL-1（信噪比為3）。本方法表現(xiàn)出良好的特異性。將該方法應(yīng)用到實際樣品檢測中，將湖水、牛奶、人尿液和人血液作為樣品進行加標回收實驗，回收率由70.0％到116.7%不等。因此該方法具有成本低廉，靈敏度高，特異性好，操作簡單，反應(yīng)時間快的優(yōu)點，具有較好的應(yīng)用前景。
　　2）基于雙位點分子識別模式的化學(xué)發(fā)光分析法檢測人口腔中的變異鏈球菌
　　

5、本文基于雙位點分子識別模式，構(gòu)建了檢測人體口腔中變異鏈球菌的化學(xué)發(fā)光分析新方法。與金黃色葡萄球菌表面的A蛋白不同的是，變異鏈球菌表面的G蛋白可以與大鼠IgG2a進行特異性結(jié)合，而A蛋白很少結(jié)合或者不結(jié)合。利用變異鏈球菌的這個特性，將大鼠IgG2a與羧基化磁珠偶聯(lián)得到第一分子識別試劑。同時，我們選用萬古霉素作為第二分子識別試劑，并標記ALP制備高靈敏的化學(xué)發(fā)光探針，進一步提高了本方法的特異性和靈敏度。在離心管中完成結(jié)合反應(yīng)后，分離出夾心復(fù)