氣單胞菌產幾丁質酶的工藝條件優(yōu)化和應用初探.pdf

1、幾丁質酶(chitinase Ec.3.2.14)能夠催化幾丁質水解為幾丁寡糖和N-乙酰氨基葡萄糖，廣泛存在于各種微生物、植物及動物細胞和組織中。由于幾丁質酶在生物防治和處理幾丁質廢物等方面具有巨大的應用潛力，因而受到廣泛的重視。 本文對實驗室保藏的幾丁質酶產生菌Ch2進行了形態(tài)結構特征、生理生化特征的鑒定，并用Biolog進行分析，初步確定為氣單胞菌屬(Aeromonas sp.)菌株。通過對Ch2菌株的生長曲線、生長條件的

2、研究，初步了解菌株的生長特性。 進行了.Aeromonas sp.Ch2發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化，以提高其產酶活力。經優(yōu)化確定的較佳培養(yǎng)基組成為：膠體幾丁質0.5％，蛋白胨1.2％，尿素0.2％，MgSO4 0.05％，K2HPO4 0.03％，NaCl 0.5％；較佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基初始pH為6.5-7.0，培養(yǎng)溫度為28℃，接種量為6％，搖瓶裝量為50 mL培養(yǎng)基/250 mL 三角瓶，180 r/min搖床培養(yǎng)3d。按優(yōu)化工

3、藝進行發(fā)酵，菌體產幾丁質酶的活性達到1.69 U/mL，比優(yōu)化實驗前提高了7.5倍。 進行了該菌3 L發(fā)酵罐產酶的研究，比較了分批發(fā)酵和補料發(fā)酵過程中發(fā)酵液中菌體生長規(guī)律， pH、還原糖和酶活力之間的關聯情況。補料發(fā)酵時，幾丁質酶的活力在65h達到產酶高峰，達到1.802U/ml，產酶高峰比分批發(fā)酵提前7h，酶活力比分批發(fā)酵提高了5％。粗酶液經硫酸銨鹽析(60％飽和度，4℃)、親和層析(以再生脫乙酰幾丁質為介質)純化后，樣品經