萊氏野村菌（Nomuraea rileyi）產(chǎn)幾丁質(zhì)酶條件及酶活性研究.pdf

1、昆蟲病原真菌(Entomopathogenic fungi)是一類重要的害蟲生防微生物。在有害昆蟲的綜合治理(Integrated Pest Management，IPM)系統(tǒng)中，昆蟲病原真菌以其特殊的營養(yǎng)方式、獨(dú)特的入侵方式和可靠的宿存機(jī)制在害蟲防治中表現(xiàn)出了強(qiáng)大的生命力。作為一種微生物殺蟲劑使用而言，除了要對目標(biāo)害蟲有效、價格廉價、使用上方便以及對環(huán)境安全無毒之外，對昆蟲病原真菌來說，獲得一種毒力高而穩(wěn)定、可在田間各種氣候下能作用持

2、久的菌株更具有特別重要的意義。 萊氏野村菌(Nomuraea rileyl)是一種重要的昆蟲病原真菌，廣泛分布在世界各地，可感染多種鱗翅目害蟲，尤其是對夜蛾科的昆蟲，如棉鈴蟲(Helicoverpa arnigera)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、粉紋夜蛾(Triehoalusia ni)等具有較好的防治效果。鑒于此，本文對萊氏野村菌CQ-31021菌株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的條件、酶性質(zhì)，不同溫度條件下幾丁質(zhì)酶的活力與

3、菌株致病力的關(guān)系以及溫度、濕度等條件對萊氏野村菌致病性影響作了初步的研究。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1.萊氏野村菌最適產(chǎn)幾丁質(zhì)酶條件在產(chǎn)酶基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，通過改變碳源、氮源等條件，得到萊氏野村菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的最適條件：酶碳源為2.0％(W/V)葡萄糖，氮源為1.2％(W/V)復(fù)合氮源(蛋白胨、牛肉膏按1：1的比例)，接種量為孢子懸液2mL(1×107/mL)，培養(yǎng)溫度28℃，培養(yǎng)液初始pH6.O，培養(yǎng)時間6d。此外，研究還表明

4、，一定濃度的吐溫-80對幾丁質(zhì)酶活性有促進(jìn)作用，而SDS則有抑制作用； 2.萊氏野村菌幾丁質(zhì)酶粗酶性質(zhì)萊氏野村菌幾丁質(zhì)酶粗酶的酶學(xué)性質(zhì)研結(jié)果表明，萊氏野村菌產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶最適反應(yīng)溫度為50℃，最適反應(yīng)pH值為6.0；粗酶的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)溫度低于40℃時幾丁質(zhì)酶較為穩(wěn)定，而溫度高于60℃時酶活力下降很快，80℃時酶活幾乎喪失，酶在pH5.5-7.O之間比較穩(wěn)定； 3.不同溫度條件下萊氏野村菌幾丁質(zhì)酶的活力從第1d至第6

5、d的時間里，在不同的處理溫度下，萊氏野村菌產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶活力均隨發(fā)酵時間的延長而逐漸增加(35℃時除外，其第1d、第2d的酶活力為0)；第6d時，17℃、20℃、23℃、26℃、30℃、35℃條件下幾丁質(zhì)酶的活力分別為8.148U/mL、9.481U/mL、10.96U/mL、12.44 U/mL、6.518 U/mL、2.667 U/mL；這表明，溫度條件的改變影響了萊氏野村菌幾丁質(zhì)酶的產(chǎn)生； 4.不同溫度條件下萊氏野村菌的致

6、病力測定在不同的溫度條件下對萊氏野村菌的致病力進(jìn)行測定，試驗(yàn)結(jié)果表明，溫度條件對萊氏野村菌的致病力有著較大的影響，尤其是高溫的影響更為顯著。在17℃、20℃、23℃、26℃的飼養(yǎng)條件下菌株的致病力較高，供試?yán)ハx的死亡率分別為：64.44％、87.78％、95.56％、83.33％；而高溫30℃、35℃時，供試?yán)ハx的死亡率均為0％； 5.感染家蠶血液中菌絲形態(tài)差異不同處理溫度下，感染萊氏野村菌的家蠶血液中的菌絲在形態(tài)上有著顯著的差

7、異：在17℃條件下，家蠶血液中的菌絲密集、纖細(xì)、短小；20℃、23℃條件下家蠶血液充滿著大量進(jìn)行營養(yǎng)生長的菌絲，但比17℃時稀疏，菌絲也長一些；而26℃時家蠶血液中的菌絲則更為稀少；30℃和35℃時則觀察不到菌絲； 6.溫度、濕度等因子對昆蟲病原真菌致病力的影響研究結(jié)果表明：在17℃-26℃溫度范圍內(nèi)，n.rileyi對家蠶都表現(xiàn)出較強(qiáng)的致病性。23℃時n.rileyi對家蠶的致病力最高，死亡率高達(dá)95.56％。17℃時家蠶幼蟲