450-470nm可見光對白色念珠菌殺滅作用的實驗研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　白色念珠菌是醫(yī)院人群真菌感染的主要致病菌。這一機會病原體可以無癥狀的定植在健康人體的許多部位。由于抗菌藥物的廣泛應用，導致了具有耐藥性的白色念珠菌的出現(xiàn)。白色念珠菌耐藥的一個主要因素是其能夠適應不同的環(huán)境，并粘附在其表面以生物膜的形式生長。生物膜的出現(xiàn)使得臨床治療白色念珠菌感染變得更加困難。生物膜內(nèi)的白色念珠菌對各種抗真菌藥物如氟康唑、制霉菌素、兩性霉素B和氯己定具有高度的抵抗性。因此，我們迫切的需要尋找一種

2、新的抗真菌方法。藍光在臨床上廣泛用來治療痤瘡。近年來，藍光，特別是波長在405nm-470nm之間，被用來殺滅銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌等各種病原菌。本實驗中，我們主要討論藍光對體外游離和生物膜內(nèi)白色念珠菌及小鼠創(chuàng)面上白色念珠菌的殺滅作用。
　　研究方法：
　　1.450-470nm可見光殺滅游離狀態(tài)白色念珠菌的實驗研究：采用平板涂板法檢測0、12、60、120、240J/cm2能量密度的藍光對白色

3、念珠菌的殺滅作用；流式細胞術(shù)檢測240J/cm2能量密度的藍光照射后0.5h、1h、2h后白色念珠菌的死亡率。
　　2.450-470nm可見光殺滅生物膜內(nèi)白色念珠菌的實驗研究：構(gòu)建白色念珠菌生物膜體外模型；將成熟生物膜模型分為空白對照組和藍光干預組兩組，藍光干預組采用240J/cm2能量密度的藍光照射，然后兩組采用Live/Dead染料染色后在激光掃描共焦顯微鏡下觀察并比較藍光的殺菌效果。
　　3.450-470nm可見光

4、殺滅小鼠皮膚創(chuàng)面上的白色念珠菌的實驗研究：24只裸鼠隨機均分為藍光干預組、陽性對照組、陰性對照組三組，全部制作裸鼠背部1cmx1cm皮膚全層缺損創(chuàng)傷模型；于藍光干預組、陽性對照組創(chuàng)面上接種20ul濃度為1x109 CFU/ml的白色念珠菌菌液；藍光干預組采用240J/cm2能量密度的藍光分別于第1、2、3天進行照射；采用平板涂板法檢測藍光殺菌效果；對各組小鼠創(chuàng)面愈合情況、小鼠體重變化進行監(jiān)測比較，對小鼠皮膚行蘇木精-伊紅染色并在顯微鏡下

5、觀察炎性細胞的浸潤情況。
　　結(jié)果：
　　1.60J/cm2、120J/cm2、240J/cm2能量密度的藍光可以有效殺滅體外游離白色念珠菌，P均<0.05;白色念珠菌經(jīng)過240J/cm2能量密度的藍光照射后0.5h、1h、2h后與空白對照組三個時相點的死亡率相比，差異顯著，p均<0.05。
　　2.白色念珠菌在96微孔板中培養(yǎng)3d即可形成成熟的生物膜；240J/cm2能量密度的藍光可以殺滅生物膜全層內(nèi)的白色念珠菌。<