不同誘因急性肺損傷大鼠肺組織NF-κB及GR表達(dá)水平與GC-,s-干預(yù)效果研究.pdf

1、目的：急性肺損傷（acute lung injury，ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是指由心源性以外的各種肺內(nèi)、外致病因素導(dǎo)致的急性、進(jìn)行性呼吸衰竭。引起AIA/ARDS的原因或高危因素很多，可以分為肺內(nèi)因素（直接因素，如重癥肺炎）和肺外因素（間接因素，如敗血癥）。炎癥反應(yīng)、肺組織損傷和纖維化是ARDS主要的發(fā)病機(jī)制和病理改變，糖皮質(zhì)激素（glucocor

2、ticoids，GCs）具有抑制炎癥反應(yīng)、減輕細(xì)胞因子對肺組織的損傷和抑制纖維化等作用，理論上來說，激素治療ARDS應(yīng)有較好的效果。但事實(shí)并非如此，臨床發(fā)現(xiàn)不同誘因的ALI患者對激素治療的反應(yīng)存在較大差異。糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid receptor，GR）表達(dá)水平的不同，可以影響GCs的療效。這可能是導(dǎo)致激素治療效果差異的機(jī)制之一。
　　 因此，本研究復(fù)制了脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS

3、）及大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli）誘導(dǎo)的急性肺損傷動(dòng)物模型，比較兩種動(dòng)物模型中細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的含量、NF-κB P65和GR的表達(dá)水平及GCs干預(yù)治療對兩種動(dòng)物模型中上述指標(biāo)的影響以探討不同誘因所致ALI的炎癥機(jī)制和激素治療效果的差異及其潛在機(jī)理，為臨床選擇性、合理性應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療不同誘因引起的ARDS提供理論依據(jù)。
　　 方法：健康雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組：①NS組：尾靜

4、脈注射生理鹽水1ml②LPS組：尾靜脈注射LPS（8mg/kg）③E.coli組：氣道內(nèi)緩慢滴注大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株懸液（5.0×109cfu/ml，3ml/kg）④NS+Dex組，⑤LPS+Dex組，⑥E.coli+Dex組，每組8只動(dòng)物。④、⑤、⑥三組為激素干預(yù)組，造模后立即腹腔注射地塞米松（Dexamethasone，Dex）（2mg/kg）。
　　 LPS，生理鹽水造模4小時(shí)后，大腸桿菌造模24小時(shí)后取材測定相應(yīng)指標(biāo)。

5、>　　 10％水合氯醛腹腔注射麻醉（3ml/kg），股動(dòng)脈放血收集血液，離心（3000rpm，4℃，10min），吸取上清，-80℃保存，檢測血清中TNF-α、IL-1β的含量。開胸處死動(dòng)物后，取右肺中葉，10％中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋HE染色，觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化并評分，石蠟包埋切片SP法染色，觀察NF-κB P65及GR陽性細(xì)胞表達(dá)部位；取右肺下葉液氮凍存做蛋白印跡。經(jīng)氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液

6、（Bronchoalveloar lavage fluid，BALF），離心（1200rpm，4℃，10min），吸取上清，-80℃保存，檢測BALF中TNF-α、IL-1β的含量。細(xì)胞沉淀懸浮于200μl生理鹽水中，進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。
　　 結(jié)果：（1）LPS組和E.coli組BALF中細(xì)胞總數(shù)均高于NS組（分別為36.22±5.60，366.97±31.63 vs13.06±1.94，P<0.01），且E.coli組高于LPS

7、組（P<0.01）。在LPS+Dex組和E.coli+Dex組BALF中細(xì)胞總數(shù)均有顯著下降（分別為19.34±2.61 vs36.22±5.60和247.25±22.16 vs366.97±31.63.P<0.01）。（2）LPS組和E.coli組光鏡下肺組織病理評分明顯高于NS組（P<0.05），而兩個(gè)肺損傷模型組之間無差別（15.38±1.06 vs15.88±1.73，P>0.05）。肺組織病理評分在LPS+Dex組顯著低于LP

8、S組（12.13±0.99 vs15.38±1.06，P<0.01），而E.coli+Dex組與E.coli組病理評分無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（14.25±1.75 vs15.88±1.73.P>0.05）。（3）LPS組和E.coli組NF-κB P65陽性細(xì)胞表達(dá)顯著高于NS組（分別為34.08±3.82，36.33±4.05 vs3.11±1.10，P<0.01）。與LPS組相比，LPS+Dex組染色明顯變淺，陽性反應(yīng)明顯減輕（26.14±3

9、.91 vs34.08±3.82，P<0.01），而E.coli+Dex組與E.coli組相比染色及陽性反應(yīng)無明顯改變（35.10±4.22 vs36.33±4.05.P>0.05）。LPS組和E.coli組GR陽性細(xì)胞表達(dá)顯著低于NS組（分別為20.80±0.88，18.06±1.67vs28.86±3.14，P<0.01）。與LPS組相比，LPS+Dex組陽性反應(yīng)明顯增高（24.58±2.67 vs20.80±0.88，P<0.01

10、），而E.coli+Dex組與E.coli組相比染色及陽性反應(yīng)無明顯改變（17.49±2.69vs18.06±1.67，P>0.05）。（4）蛋白印跡結(jié)果顯示，NS組NF-κBP65條帶顏色與兩模型組相比較淺，LPS模型組與相應(yīng)的Dex治療組相比顏色較深，E.coli模型組與相應(yīng)的Dex治療組相比條帶顏色無明顯變化。NS組GR條帶顏色與兩模型組相比較深，LPS模型組與相應(yīng)的Dex治療組相比顏色較淺，E.coli模型組與相應(yīng)的Dex治療組

11、相比條帶顏色無明顯變化。（5）LPS組和E.coli組血清和BALF中TNF-α/及IL-1β含量顯著高于NS組（P<0.01）。LPS+Dex組血清和BALF中TNF-α及IL-1β含量低于LPS組（P<0.05）。E.coli+Dex組血清和BALF中TNF-α含量及IL-1β含量與E.coli組相比無差別（P>0.05）。
　　 結(jié)論：1.大鼠氣道注射大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株懸液可以造成肺內(nèi)直接感染引起的ALI/ARDS模型。